染色体微阵列分析技术在先天性消化道梗阻胎儿的应用研究
发布时间：2021-11-16 12:51
目的1.分析产前诊断中先天性消化道梗阻（congenital gastrointestinal obstructions,CGIO）胎儿的染色体核型结果情况;2.探究全基因组高分辨染色体微阵列（chromosome microarray analysis,CMA）技术在CGIO胎儿中的应用价值;3.对CGIO胎儿病例的CMA结果进行表型-基因型的关系分析,同时识别与消化道梗阻相关的拷贝数变异及候选基因;4.随访了解CGIO胎儿临床结局,为提高对CGIO胎儿的认知水平并建立先天性消化道梗阻胎儿病例的产前诊断及流程提供理论依据。方法1.将2012年5月到2019年5月在广州市妇女儿童医疗中心产前诊断中心进行侵入性产前诊断的203例CGIO胎儿样本及其父母样本纳入研究。根据胎儿梗阻类型分类为:食管狭窄/闭锁（n=27）、十二指肠狭窄/闭锁（n=110）、小肠狭窄/闭锁（n=38）、大肠狭窄/闭锁（n=28）。依据超声提示有无合并其他指标异常分为2组,孤立性CGIO组（n=164）和复合性CGIO组（n=39,含其他结构畸形和/或超声软指标异常）。2.根据临床知情同意及冻存样本情况综合考虑,分...
【文章来源】：广州医科大学广东省
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CMA操作实验流程图
广州医科大学硕士学位论文图1：CMA操作实验流程图具体操作步骤如下：3.4.1样本DNA质控：DNA浓度实验范围50-100ng/ul，纯度（OD260/OD280）位于1.8-2.0之间。浓度＞100ng/ul时可加AE缓冲液稀释。实验前评估样本完整性，用1%-1.4%的琼脂糖凝胶电泳分析，电泳条带介于10-20kb之间。无条带者提示已降解则不进行后续实验。图2：DNA电泳评估图谱16
材料和方法3.4.4.5将混合液缓慢倒入加样槽中，使用100ul排枪吸取90ul混合液到相对应的孔板中，此时每孔中样本混合物总体积为100ul；3.4.4.6胶膜密封孔板，封闭完好后震荡混匀，2000rpm，离心1分钟；3.4.4.7将孔板放入已预热好的PCR仪中，运行CytoScanPCR程序：94℃；（3min94℃30s，60℃，45s68℃）15s×30个循环；68℃；7min4℃维持。3.4.5PCR产物电泳质检3.4.5.1标记新的8联管，每孔各加入5ulNuclease-Freewater；3.4.5.2每份PCR产物中吸取3ul产物到对应的8联管中，盖子紧闭，震荡混匀后瞬时离心；3.4.5.3配制2%的琼脂凝胶，将上述吸取到的8联管产物稀释液3ul加入到凝胶点样孔中进行电泳，凝胶成像并记录，产物片段长度应在150-2000bp之间，如图3。图3：PCR产物电泳质检图谱3.4.6PCR产物纯化3.4.6.1将PCR产物中的4份扩增物完全相对应转移至新的已标记1.5ml离心管中；3.4.6.2从4℃冰箱中取出纯化磁珠，上下混匀，并吸取720ul磁珠到各个离心管；盖子紧闭，上下颠倒至少10次至混匀，室温静置10分钟后放入离心机，16100rcf，离心3分钟；3.4.6.3将离心管放置于磁力架上，吸弃上清液，操作过程中勿触碰磁珠；每管加入1mlPurificationWashBuffer，插入泡沫振荡器中，震荡2分钟后放入离心机，16100rcf，离心3分钟；19
【参考文献】：
期刊论文
[1]Clinical relationship between EDN-3 gene, EDNRB gene and Hirschsprung’s disease[J]. Xiang-Long Duan Guo-Wei Li Department of General Surgery,Second Hospital of Xi’an Jiaotong University,Xi’an 710004,Shaanxi Province,ChinaXian-Sheng Zhang Department of Pediatric Surgery,Second Hospital of Xi’an Jiaotong University,Xi’an 710004,Shaanxi Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2003(12)
本文编号：3498926
【文章来源】：广州医科大学广东省
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CMA操作实验流程图
广州医科大学硕士学位论文图1：CMA操作实验流程图具体操作步骤如下：3.4.1样本DNA质控：DNA浓度实验范围50-100ng/ul，纯度（OD260/OD280）位于1.8-2.0之间。浓度＞100ng/ul时可加AE缓冲液稀释。实验前评估样本完整性，用1%-1.4%的琼脂糖凝胶电泳分析，电泳条带介于10-20kb之间。无条带者提示已降解则不进行后续实验。图2：DNA电泳评估图谱16
材料和方法3.4.4.5将混合液缓慢倒入加样槽中，使用100ul排枪吸取90ul混合液到相对应的孔板中，此时每孔中样本混合物总体积为100ul；3.4.4.6胶膜密封孔板，封闭完好后震荡混匀，2000rpm，离心1分钟；3.4.4.7将孔板放入已预热好的PCR仪中，运行CytoScanPCR程序：94℃；（3min94℃30s，60℃，45s68℃）15s×30个循环；68℃；7min4℃维持。3.4.5PCR产物电泳质检3.4.5.1标记新的8联管，每孔各加入5ulNuclease-Freewater；3.4.5.2每份PCR产物中吸取3ul产物到对应的8联管中，盖子紧闭，震荡混匀后瞬时离心；3.4.5.3配制2%的琼脂凝胶，将上述吸取到的8联管产物稀释液3ul加入到凝胶点样孔中进行电泳，凝胶成像并记录，产物片段长度应在150-2000bp之间，如图3。图3：PCR产物电泳质检图谱3.4.6PCR产物纯化3.4.6.1将PCR产物中的4份扩增物完全相对应转移至新的已标记1.5ml离心管中；3.4.6.2从4℃冰箱中取出纯化磁珠，上下混匀，并吸取720ul磁珠到各个离心管；盖子紧闭，上下颠倒至少10次至混匀，室温静置10分钟后放入离心机，16100rcf，离心3分钟；3.4.6.3将离心管放置于磁力架上，吸弃上清液，操作过程中勿触碰磁珠；每管加入1mlPurificationWashBuffer，插入泡沫振荡器中，震荡2分钟后放入离心机，16100rcf，离心3分钟；19
【参考文献】：
期刊论文
[1]Clinical relationship between EDN-3 gene, EDNRB gene and Hirschsprung’s disease[J]. Xiang-Long Duan Guo-Wei Li Department of General Surgery,Second Hospital of Xi’an Jiaotong University,Xi’an 710004,Shaanxi Province,ChinaXian-Sheng Zhang Department of Pediatric Surgery,Second Hospital of Xi’an Jiaotong University,Xi’an 710004,Shaanxi Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2003(12)
本文编号：3498926
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