胃癌间充质干细胞调节PD-1/PD-L1通路促进胃癌细胞免疫逃逸作用及机制

发布时间：2021-11-23 00:12

　　目的:研究胃癌微环境中胃癌间充质干细胞（Gastric cancer tissues-derived mesenchymal stem cell-like cells,GC-MSCs）对胃癌细胞表面分子程序性死亡受体1（Programmed death 1,PD-1）及程序性死亡受体配体1（Programmed death-ligand 1,PD-L1）表达的影响,探讨GC-MSCs调节PD-L1表达过程中的重要机制,揭示GC-MSCs在肿瘤免疫逃逸中的重要作用,为阐明GC-MSCs的免疫调节机制提供实验依据。方法:利用免疫组织化学法、Western blot检测胃癌组织及相应癌旁组织中PD-1、PD-L1的表达情况,流式细胞术检测胃癌细胞株中PD-1、PD-L1的表达情况并利用Western blot进行验证。收集胃癌间充质干细胞的上清（Culture medium of gastric cancer tissues-derived mesenchymal stem cell-like cell,GCMSC-CM）及骨髓间充质干细胞的上清（Culture medium of bone... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
主要英文缩略词中英文注释表
第一章 绪论
    1.1 肿瘤微环境
    1.2 间充质干细胞
        1.2.1 MSCs与肿瘤
        1.2.2 MSCs与免疫调节
    1.3 PD-1/PD-L1与肿瘤免疫
        1.3.1 PD-1/PD-L1的简介
        1.3.2 PD-1/PD-L1与肿瘤
        1.3.3 PD-1/PD-L1与免疫抑制
    1.4 c-Myc与肿瘤
        1.4.1 c-Myc基因的简介
        1.4.2 c-Myc与肿瘤
        1.4.3 c-Myc与PD-L1
        1.4.4 c-Myc与JQ1
    1.5 小结
第二章 研究目的、方法、实验设计方案和意义
    2.1 研究目的
    2.2 研究方法
    2.3 实验设计方案
    2.4 研究意义
第三章 PD-1、PD-L1在胃癌微环境及胃癌细胞株中的表达
    3.1 材料和试剂
        3.1.1 标本采集
        3.1.2 细胞株
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 主要仪器及相关耗材
        3.1.5 溶液的配置
    3.2 方法
        3.2.1 细胞培养
        3.2.2 健康人外周血单个核细胞的分离
        3.2.3 免疫组织化学染色
        3.2.4 流式细胞术
        3.2.5 胃癌细胞株及胃癌组织中蛋白的提取
        3.2.6 蛋白免疫印迹
    3.3 结果
        3.3.1 胃癌细胞株中PD-1、PD-L1的表达情况
        3.3.2 胃癌组织及相应癌旁组织中PD-1、PD-L1的表达情况
    3.4 讨论
第四章 GC-MSCs对肿瘤细胞PD-L1的调控及在免疫逃逸中的作用
    4.1 材料和试剂
        4.1.1 标本采集
        4.1.2 细胞株
        4.1.3 主要试剂
        4.1.4 主要器材
        4.1.5 相关试剂的配置
    4.2 方法
        4.2.1 GC-MSCs的分离与培养
        4.2.2 BM-MSCs的分离与培养
        4.2.3 GC-MSCs及BM-MSCs条件培养基的配制
        4.2.4 Western blot检测肿瘤细胞经GCMSC-CM处理不同时间后PD-L1的表达情况
        4.2.5 免疫荧光法验证SGC-7901、MGC-803 细胞经GCMSC-CM处理 24h后PD-L1的表达
        4.2.6 流式细胞术检测经间充质干细胞上清刺激后胃癌细胞株PD-1、PD-L1的表达情况
        4.2.7 定量PCR检测GCMSC-CM刺激后肿瘤细胞中PD-L1 mRNA水平的表达情况
        4.2.8 LDH法检测活化的PBMC对GCMSC-CM处理后的肿瘤细胞MGC-803 细胞的杀伤作用
        4.2.9 结晶紫染色计数经活化PBMC杀伤后SGC-7901、MGC-803 细胞存活情况
        4.2.10 统计分析
    4.3 结果
        4.3.1 GC-MSC诱导肿瘤细胞PD-L1表达及时间依赖性
        4.3.2 GC-MSCs与BM-MSCs对肿瘤细胞PD-L1诱导作用的比较
        4.3.3 GC-MSCs对肿瘤细胞PD-1 表达的影响
        4.3.4 GC-MSCs诱导肿瘤细胞发生免疫逃逸
    4.4 讨论
第五章 GC-MSCs调控胃癌细胞PD-L1表达机制
    5.1 材料和试剂
        5.1.1 细胞株
        5.1.2 主要试剂
        5.1.3 主要器材
    5.2 方法
        5.2.1 JQ1药物终浓度的配制
        5.2.2 JQ1与GCMSC-CM混合培养基的配制
        5.2.3 Western blot检测肿瘤细胞经JQ1和/或GCMSC-CM作用后c-Myc、PD-L1的表达情况
        5.2.4 流式细胞术检测经JQ1作用后胃癌细胞SGC-7901 细胞凋亡情况
        5.2.5 LDH法检测活化的PBMC对JQ1处理后的SGC-7901 细胞杀伤作用
        5.2.6 结晶紫染色计数经活化PBMC杀伤后SGC-7901/MGC-803 细胞存活情况
        5.2.7 统计分析
    5.3 结果
        5.3.1 GCMSC-CM诱导肿瘤细胞c-Myc的表达
        5.3.2 c-Myc抑制剂JQ1处理肿瘤细胞后肿瘤细胞PD-L1、c-Myc的表达情况
        5.3.3 肿瘤细胞PD-L1表达降低后逆转GC-MSCs诱导的免疫逃逸
    5.4 讨论
第六章 结论与展望
    一、结论
    二、展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的的学术论文及参加的会议
    一.发表的论文
    二、会议发表论文
    三、参加会议



本文编号：3512721