右归丸对高糖缺氧条件下大鼠视网膜微血管内皮细胞mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路的干预作用研究
发布时间：2021-11-25 04:48
目的:基于视网膜新生血管生成相关的mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路,探讨右归丸治疗增殖性糖尿病视网膜病变的作用靶点和分子机制,为中医药防治糖尿病视网膜病变提供新的思路与科学依据。方法:选择大鼠视网膜微血管内皮细胞,通过在培养基中同时加入33mmol/L的葡萄糖和100μmol/L的CoCl2,将内皮细胞培养96h,建立体外高糖缺氧细胞模型,模拟PDR过度增殖的病理状态。将内皮细胞按不同培养条件分为正常组、模型组、右归丸药物血清高、中、低剂量组。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和细胞划痕法分别观察右归丸药物血清对模型细胞增殖和迁移的影响;采用RT-PCR法检测各组细胞mTORmRNA、4EBP1mRNA、HIF-1αmRNA、VEGFmRNA基因表达水平;Western blot法检测各组细胞p-mTOR、p-4EBP1、HIF-1α、VEGF蛋白表达水平。结果:1.在大鼠视网膜微血管内皮细胞培养基中加入33mmol/L的葡萄糖和100umol/L的CoCl2培养96h,可成功模拟出PDR内皮细胞过度增殖的病理状态。2.MTT检测细胞增殖...
【文章来源】：甘肃中医药大学甘肃省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
右归丸药物血清对大鼠视网膜微血管内皮细胞增殖的影响
右归丸对高糖缺氧条件下大鼠视网膜微血管内皮细胞mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路的干预作用研究32表5右归丸药物血清对高糖缺氧模型大鼠视网膜微血管内皮细胞相关蛋白表达的影响（xs）相对表达量分组Np-mTORp-4EBP1HIF-1αVEGF正常组31±0.05541±0.05331±0.08661±0.1298模型组31.6536±0.0863▲1.4977±0.115▲1.7709±0.1012▲1.6389±0.1227▲高剂量组31.1335±0.0648●1.1404±0.0891●1.0225±0.0847●1.1288±0.0961●中剂量组31.3253±0.1009▲●1.3055±0.0972▲1.2052±0.0880●1.3639±0.1079▲低剂量组31.4604±0.0751▲◆1.3436±0.0984▲1.4717±0.0924▲●◆1.4617±0.1176▲注：组间两两比较时调整检验水准为a′=0.05/比较次数=0.005，，与正常组比较▲P≤0.005，与模型组比较●P≤0.005，与高剂量组比较◆P≤0.005。空白组模型组图7各组细胞蛋白表达条带图高剂量组GAPDHp-mTORp-4EBP1HIF-αVEGF37KD26KD26KD90KD26KD中剂量组低剂量组
右归丸对高糖缺氧条件下大鼠视网膜微血管内皮细胞mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路的干预作用研究40图13mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路示意图4.2.3.2HIF-1α与PDR持续的氧气供应对于所有真核生物的正常组织发育、动态平衡和功能是必不可少的。氧是调节膜运输、细胞内信号传递、许多基因表达和细胞存活的主要元素[65]。当组织氧合需求超过血管供应时，就会发生缺氧。对低氧水平的反应是由HIF-1介导的。HIF-1是由氧依赖性亚基（HIF-1α）和组成性表达核亚基（HIF-1β）组成的异二聚体复合物[66]，在人类中机体内，HIF1a、EPAS1和HIF3A基因分别编码三种不同的HIF-α亚型(HIF-1α、HIF-2α和HIF-3α)[67]。缺氧诱导因子-1α在所有组织中普遍表达，HIF-2α主要在肺、内皮和颈动脉表达；HIF-3α主要在成人胸腺、肺、脑、心脏和肾脏中表达[68]。新生血管生成是一个涉及多种基因蛋白的复杂过程。缺氧是血管生成开关重要的诱导因子，HIF-1α可通过直接转录上调VEGF，在生成新生血管中起主导作用。视网膜是一种光敏组织，也是人体代谢最活跃的组织之一。眼球的氧气供应是通过脉络膜和视网膜血管循环来调节的，这两种血管在调节视网膜生理方面都起着重要作用。研究表明敲除小鼠HIF-1α基因的DM小鼠模型中，VEGF和细胞间粘附分子-1（ICAM-1）的产生减少。与野生型小鼠相比，敲除HIF-1α基因小鼠的血管渗漏和新生血管明显减少[69]。张瑞萍等用小分子RNA干扰DR小鼠HIF-1α，发现特异性沉默HIF-1α基因可减少VEGF表达抑制血管新生[70]。这些研究均表明改变HIF-1α通路可能是延缓NPDR向PDR
【参考文献】：
期刊论文
[1]N-乙酰半胱氨酸通过AMPK/SIRT1途径抑制缺氧诱导的大鼠脑血管内皮细胞损伤[J]. 张蕴,韩新生,张洪阳,徐建可. 中国动脉硬化杂志. 2020(02)
[2]小分子RNA干扰HIF-1α对糖尿病视网膜病变小鼠视网膜的保护作用及机制[J]. 张瑞萍,刘红凌. 国际眼科杂志. 2019(12)
[3]不同方法构建的心肌细胞缺氧/复氧模型[J]. 宁小伟,苏和,张瑞芬. 世界最新医学信息文摘. 2019(93)
[4]基于“少火生气,壮火食气”理论论治儿童难治性肾病综合征[J]. 王雪峰,张秀英,王美娇. 中医杂志. 2019(16)
[5]基于“阴中求阳”理论探讨右归丸及其拆方对肾阳虚证大鼠睾丸组织的影响[J]. 王孙亚,李望辉,韩忠,周兴,宾东华,孙贵香,何清湖. 中华中医药杂志. 2018(10)
[6]结合血清代谢组学与支持向量回归机揭示右归丸调节肾阳虚证的代谢标志物群及其作用机制[J]. 陈瑞群,廖成彬,郭茜,张磊,王秀凤. 中国实验方剂学杂志. 2018(13)
[7]2型糖尿病患者中医证候特征与视网膜病变进展相关性临床研究[J]. 王养忠,柳红芳,姜旻,许家骏. 中华中医药杂志. 2018(03)
[8]糖基化终产物对糖尿病微血管病变的影响及中医药研究[J]. 胡秀,方朝晖. 山西中医学院学报. 2018(01)
[9]附子理中汤对脾阳虚大鼠脂质过氧化损伤和能量代谢障碍的影响[J]. 翟美丽,于漫,刘俊兰,王彩霞. 中华中医药学刊. 2017(11)
[10]糖尿病视网膜病变发展的相关危险因素及防治策略[J]. 吴立岩. 中国冶金工业医学杂志. 2017(05)
硕士论文
[1]右归丸药物血清对体外高糖缺氧条件下大鼠视网膜微血管内皮细胞VEGF/PI3K/Akt信号通路的影响[D]. 杨敏.甘肃中医药大学 2018
[2]基于“阴中求阳”立法之右归丸对糖尿病视网膜病变大鼠VEGF-VEGFR促存活信号通路的调控作用研究[D]. 李欢.甘肃中医药大学 2016
[3]红景天苷对体外高糖缺氧环境下大鼠心肌微血管内皮细胞Flk-1/Akt/eNOS信号通路等影响的研究[D]. 翟仰魁.北京协和医学院 2013
[4]黄芪提取物对体外高糖培养大鼠视网膜微血管内皮细胞影响的实验研究[D]. 吴春晓.成都中医药大学 2007
本文编号：3517432
【文章来源】：甘肃中医药大学甘肃省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
右归丸药物血清对大鼠视网膜微血管内皮细胞增殖的影响
右归丸对高糖缺氧条件下大鼠视网膜微血管内皮细胞mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路的干预作用研究32表5右归丸药物血清对高糖缺氧模型大鼠视网膜微血管内皮细胞相关蛋白表达的影响（xs）相对表达量分组Np-mTORp-4EBP1HIF-1αVEGF正常组31±0.05541±0.05331±0.08661±0.1298模型组31.6536±0.0863▲1.4977±0.115▲1.7709±0.1012▲1.6389±0.1227▲高剂量组31.1335±0.0648●1.1404±0.0891●1.0225±0.0847●1.1288±0.0961●中剂量组31.3253±0.1009▲●1.3055±0.0972▲1.2052±0.0880●1.3639±0.1079▲低剂量组31.4604±0.0751▲◆1.3436±0.0984▲1.4717±0.0924▲●◆1.4617±0.1176▲注：组间两两比较时调整检验水准为a′=0.05/比较次数=0.005，，与正常组比较▲P≤0.005，与模型组比较●P≤0.005，与高剂量组比较◆P≤0.005。空白组模型组图7各组细胞蛋白表达条带图高剂量组GAPDHp-mTORp-4EBP1HIF-αVEGF37KD26KD26KD90KD26KD中剂量组低剂量组
右归丸对高糖缺氧条件下大鼠视网膜微血管内皮细胞mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路的干预作用研究40图13mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路示意图4.2.3.2HIF-1α与PDR持续的氧气供应对于所有真核生物的正常组织发育、动态平衡和功能是必不可少的。氧是调节膜运输、细胞内信号传递、许多基因表达和细胞存活的主要元素[65]。当组织氧合需求超过血管供应时，就会发生缺氧。对低氧水平的反应是由HIF-1介导的。HIF-1是由氧依赖性亚基（HIF-1α）和组成性表达核亚基（HIF-1β）组成的异二聚体复合物[66]，在人类中机体内，HIF1a、EPAS1和HIF3A基因分别编码三种不同的HIF-α亚型(HIF-1α、HIF-2α和HIF-3α)[67]。缺氧诱导因子-1α在所有组织中普遍表达，HIF-2α主要在肺、内皮和颈动脉表达；HIF-3α主要在成人胸腺、肺、脑、心脏和肾脏中表达[68]。新生血管生成是一个涉及多种基因蛋白的复杂过程。缺氧是血管生成开关重要的诱导因子，HIF-1α可通过直接转录上调VEGF，在生成新生血管中起主导作用。视网膜是一种光敏组织，也是人体代谢最活跃的组织之一。眼球的氧气供应是通过脉络膜和视网膜血管循环来调节的，这两种血管在调节视网膜生理方面都起着重要作用。研究表明敲除小鼠HIF-1α基因的DM小鼠模型中，VEGF和细胞间粘附分子-1（ICAM-1）的产生减少。与野生型小鼠相比，敲除HIF-1α基因小鼠的血管渗漏和新生血管明显减少[69]。张瑞萍等用小分子RNA干扰DR小鼠HIF-1α，发现特异性沉默HIF-1α基因可减少VEGF表达抑制血管新生[70]。这些研究均表明改变HIF-1α通路可能是延缓NPDR向PDR
【参考文献】：
期刊论文
[1]N-乙酰半胱氨酸通过AMPK/SIRT1途径抑制缺氧诱导的大鼠脑血管内皮细胞损伤[J]. 张蕴,韩新生,张洪阳,徐建可. 中国动脉硬化杂志. 2020(02)
[2]小分子RNA干扰HIF-1α对糖尿病视网膜病变小鼠视网膜的保护作用及机制[J]. 张瑞萍,刘红凌. 国际眼科杂志. 2019(12)
[3]不同方法构建的心肌细胞缺氧/复氧模型[J]. 宁小伟,苏和,张瑞芬. 世界最新医学信息文摘. 2019(93)
[4]基于“少火生气,壮火食气”理论论治儿童难治性肾病综合征[J]. 王雪峰,张秀英,王美娇. 中医杂志. 2019(16)
[5]基于“阴中求阳”理论探讨右归丸及其拆方对肾阳虚证大鼠睾丸组织的影响[J]. 王孙亚,李望辉,韩忠,周兴,宾东华,孙贵香,何清湖. 中华中医药杂志. 2018(10)
[6]结合血清代谢组学与支持向量回归机揭示右归丸调节肾阳虚证的代谢标志物群及其作用机制[J]. 陈瑞群,廖成彬,郭茜,张磊,王秀凤. 中国实验方剂学杂志. 2018(13)
[7]2型糖尿病患者中医证候特征与视网膜病变进展相关性临床研究[J]. 王养忠,柳红芳,姜旻,许家骏. 中华中医药杂志. 2018(03)
[8]糖基化终产物对糖尿病微血管病变的影响及中医药研究[J]. 胡秀,方朝晖. 山西中医学院学报. 2018(01)
[9]附子理中汤对脾阳虚大鼠脂质过氧化损伤和能量代谢障碍的影响[J]. 翟美丽,于漫,刘俊兰,王彩霞. 中华中医药学刊. 2017(11)
[10]糖尿病视网膜病变发展的相关危险因素及防治策略[J]. 吴立岩. 中国冶金工业医学杂志. 2017(05)
硕士论文
[1]右归丸药物血清对体外高糖缺氧条件下大鼠视网膜微血管内皮细胞VEGF/PI3K/Akt信号通路的影响[D]. 杨敏.甘肃中医药大学 2018
[2]基于“阴中求阳”立法之右归丸对糖尿病视网膜病变大鼠VEGF-VEGFR促存活信号通路的调控作用研究[D]. 李欢.甘肃中医药大学 2016
[3]红景天苷对体外高糖缺氧环境下大鼠心肌微血管内皮细胞Flk-1/Akt/eNOS信号通路等影响的研究[D]. 翟仰魁.北京协和医学院 2013
[4]黄芪提取物对体外高糖培养大鼠视网膜微血管内皮细胞影响的实验研究[D]. 吴春晓.成都中医药大学 2007
本文编号：3517432
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