LUCAT1/Beclin1调控肺腺癌A549干细胞干性的研究
发布时间：2021-11-28 11:38
目的:探讨LUCAT1与Beclin1的关系及其在调控肺腺癌A549干细胞干性中的作用。方法:1.通过无血清悬浮培养法富集肺腺癌A549干细胞,采用FCM检测CD44+和CD133+标记细胞比例。2.采用克隆形成实验、Transwell迁移侵袭实验检测A549-MN及A549-SC的生物学功能。3.通过qRT-PCR、WB和TEM观察A549-MN及A549-SC的干性及自噬水平。4.观察敲低或过表达Beclin1后A549-SC的自噬泡数量变化、功能变化及干性变化。5.通过基因芯片技术对A549-MN和A549-SC之间差异表达的LncRNA进行大规模筛选并采用qRT-PCR验证。6.检测敲低或过表达LUCAT1后A549-SC的Beclin1表达量及生物学功能变化。7.采用qRT-PCR及WB检测敲低或过表达LUCAT1后A549-SC的自噬及干性水平。结果:1.A549-SC中CD44+和CD133+标记细胞率（13.77±2.43%）高于A549-MN（1.50±0.24%）（P<0....
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
假说图本研究首先明确肺腺癌A549细胞和A549干细胞的自噬水平，再通过敲低/过表达自噬关键基因Beclin1来检测干性水平以明确Beclin1在维持肺癌干细胞干性中的作用
遵义医科大学硕士学位论文刘长路223结果3.1悬浮干细胞诱导A549-MN在10%FBS的1640培养液中呈梭形贴壁生长（图1a），而在含各种诱导因子的无血清培养基中，细胞3~5d后可形成形态较小的悬浮球，分散于培养瓶内，未成球的单个细胞逐渐凋亡（图1b），7~10d后，细胞团数目增多，直径增大，形态趋于球形，有一定的折光性（图1c）。传代培养第15天后可见微球体体积明显增大，球内细胞结合更加紧密且形态越趋于球形，可以稳定传代（图1d）。表明无血清悬浮培养法能富集具有自我更新能力的人肺腺癌A549干细胞。图1：显微镜下A549细胞生长（×200倍，标尺=50μm）a：A549贴壁生长b：A549用SFM培养第5dc：A549用SFM培养第10dd：A549用SFM培养第15d3.2A549-SC中CD44+和CD133+标记细胞CD44及CD133是肺癌干细胞重要的表面标志物，FCM结果显示，A549-SC中CD44+和CD133+标记细胞率（13.77±2.43%）高于A549-MN（1.5±0.24%）（P<0.01），表明无血清悬浮培养法富集的A549-SC具有较高的干细胞成分，见图2、表1。
遵义医科大学硕士学位论文刘长路23图2：流式细胞术检测CD44+和CD133+标记细胞比例a.流式图b.半定量分析表1：A549-MN和A549-SC中CD44+和CD133+细胞比例（x±s，n=3）注：**表示与A549-MN相比，P<0.053.3A549-SC克隆形成能力克隆形成能力也是LCSCs重要的生物学特性，可反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。本实验结果显示，A549-SC的克隆形成数（95.67±11.26个/平皿）比A549-MN（63.67±6.55个/平皿）增多，P<0.05，表明A549-SC的克隆形成能力较A549-MN增强，见表2、图3。表2：A549-MN和A549-SC的克隆形成数（x±s，n=3）注：*表示与A549-MN相比，P<0.05组别CD133+和CD44+比例（%）A549-MN1.50±0.24A549-SC13.77±2.43**组别克隆形成数（个）A549-MN63.67±6.55A549-SC95.67±11.26*
【参考文献】：
期刊论文
[1]Molecular modulation of autophagy: New venture to target resistant cancer stem cells[J]. Harpreet K MANDhair,Miroslav Arambasic,Urban Novak,Ramin Radpour. World Journal of Stem Cells. 2020(05)
[2]自噬基因Beclin1在人肺腺癌A549细胞系SP及非SP细胞亚群中的表达[J]. 赵星,赵松,杨洋. 中国老年学杂志. 2012(12)
本文编号：3524357
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
假说图本研究首先明确肺腺癌A549细胞和A549干细胞的自噬水平，再通过敲低/过表达自噬关键基因Beclin1来检测干性水平以明确Beclin1在维持肺癌干细胞干性中的作用
遵义医科大学硕士学位论文刘长路223结果3.1悬浮干细胞诱导A549-MN在10%FBS的1640培养液中呈梭形贴壁生长（图1a），而在含各种诱导因子的无血清培养基中，细胞3~5d后可形成形态较小的悬浮球，分散于培养瓶内，未成球的单个细胞逐渐凋亡（图1b），7~10d后，细胞团数目增多，直径增大，形态趋于球形，有一定的折光性（图1c）。传代培养第15天后可见微球体体积明显增大，球内细胞结合更加紧密且形态越趋于球形，可以稳定传代（图1d）。表明无血清悬浮培养法能富集具有自我更新能力的人肺腺癌A549干细胞。图1：显微镜下A549细胞生长（×200倍，标尺=50μm）a：A549贴壁生长b：A549用SFM培养第5dc：A549用SFM培养第10dd：A549用SFM培养第15d3.2A549-SC中CD44+和CD133+标记细胞CD44及CD133是肺癌干细胞重要的表面标志物，FCM结果显示，A549-SC中CD44+和CD133+标记细胞率（13.77±2.43%）高于A549-MN（1.5±0.24%）（P<0.01），表明无血清悬浮培养法富集的A549-SC具有较高的干细胞成分，见图2、表1。
遵义医科大学硕士学位论文刘长路23图2：流式细胞术检测CD44+和CD133+标记细胞比例a.流式图b.半定量分析表1：A549-MN和A549-SC中CD44+和CD133+细胞比例（x±s，n=3）注：**表示与A549-MN相比，P<0.053.3A549-SC克隆形成能力克隆形成能力也是LCSCs重要的生物学特性，可反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。本实验结果显示，A549-SC的克隆形成数（95.67±11.26个/平皿）比A549-MN（63.67±6.55个/平皿）增多，P<0.05，表明A549-SC的克隆形成能力较A549-MN增强，见表2、图3。表2：A549-MN和A549-SC的克隆形成数（x±s，n=3）注：*表示与A549-MN相比，P<0.05组别CD133+和CD44+比例（%）A549-MN1.50±0.24A549-SC13.77±2.43**组别克隆形成数（个）A549-MN63.67±6.55A549-SC95.67±11.26*
【参考文献】：
期刊论文
[1]Molecular modulation of autophagy: New venture to target resistant cancer stem cells[J]. Harpreet K MANDhair,Miroslav Arambasic,Urban Novak,Ramin Radpour. World Journal of Stem Cells. 2020(05)
[2]自噬基因Beclin1在人肺腺癌A549细胞系SP及非SP细胞亚群中的表达[J]. 赵星,赵松,杨洋. 中国老年学杂志. 2012(12)
本文编号：3524357
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