棕榈酸促进IP3R1蛋白稳定性诱导肝细胞线粒体功能障碍的机制探索

发布时间：2021-11-29 10:50

　　目的:代谢相关脂肪性肝病（MAFLD）,既往又称非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）,是代谢综合征的肝脏表型,是以肝细胞脂肪变性和脂质沉积为主要特征的一种慢性代谢性疾病。世界范围内NAFLD的人群患病率约为25.24%,最新流行病学结果显示:2019年我国NAFLD患病率约29.8%。NAFLD的临床病理学范围包括非酒精性脂肪肝（NAFL）或单纯性脂肪肝,非酒精性脂肪性肝炎（NASH）,肝纤维化和肝硬化。棕榈酸（PA）诱导的肝细胞凋亡在NAFLD的进展中至关重要。1,4,5-三磷酸肌醇1型受体（IP3R1）是细胞内Ca²⁺释放通道,参与PA诱导的肝细胞凋亡。尽管NAFLD患者和PA处理的肝细胞中IP3R1蛋白的表达都表现为明显升高,但目前尚不清楚PA如何促进IP3R1的表达。因此,本研究拟探索PA处理肝细胞后IP3R1蛋白表达增加的原因,并初步探讨其分子机制。方法:第一部分:不同浓度PA处理肝细胞,进行检测线粒体膜电位、凋亡蛋白cleaved-caspase3和细胞凋亡,以确定诱导肝细胞线粒体功能障碍和细胞凋亡的最适PA浓度,并用MitoSOX染色检测了该最适PA浓度... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

棕榈酸对线粒体超氧化物聚积的影响

重庆医科大学硕士研究生学位论文21显降低，具有统计学意义（图1.1，P<0.001）。图1.1棕榈酸对线粒体膜电位的影响Figure1.1EffectofPAonmitochondrialmembranepotential酶标仪检测JC-1的荧光强度；n=3，均数±标准误，***P<0.001与0PA处理组比较。Mitochondrialmembranepotentialat24hwasassessedbyJC-1fluorescenceinL02cells;n=3,Mean±SEM,***P＜0.001vs0PA-treatmentgroupMitoSOX染色用于检测细胞内超氧化物聚积，结果显示，与ctrl组相比，PA组MitoSOX染色红色荧光明显增强，提示PA增强L02细胞内的超氧化物聚积，出现线粒体功能损伤（图1.2，P<0.001）。图1.2棕榈酸对线粒体超氧化物聚积的影响Figure1.2EffectofPAonmitochondrialsuperoxideaccumulationa)激光共聚焦显微镜观察MitoSox染色；b)MitoSOX染色靶图；n=3，均数±标准误，***P<0.001与Ctrl组比较a)MitochondrialsuperoxidewasdetectedbyMitoSOXstaining;b)Meanfluorescenceintensity(MFI)ofMitoSOX;n=3,Mean±SEM,***P＜0.001vsCtrlgroup

重庆医科大学硕士研究生学位论文222.2棕榈酸处理导致肝细胞凋亡Cleaved-caspase-3是重要的凋亡分子,cleaved-caspase-3表达的增加常常提示细胞凋亡的发生。Westernblot结果显示，无论在L02细胞上，还是在HepG2细胞上，cleaved-caspase-3的表达均随着PA处理浓度的增加而增加，提示肝细胞的凋亡具有PA浓度依赖性（图1.3，P<0.05）。图1.3棕榈酸对凋亡蛋白的影响Figure1.3EffectofPAonapoptosisproteina）Western-blot检测cleaved-caspase-3；b）cleaved-caspase-3/actin的靶图；n=3，均数±标准误，**P<0.01与0mMPA组比较a)Cleaved-caspase3-proteinassociatedwithapoptosiswasdetectedbywesternblotinbothinL02andHepG2cells;b)Targetmapofcleaved-caspase-3/actin;n=3,Mean±SEM,**P＜0.01vs0mMPAgroupAnnexin/PI对不同浓度PA处理的L02细胞进行染色，流式细胞仪检测细胞凋亡，结果显示，在对照细胞（0mMPA）和以0.2mMPA、0.4mMPA和0.8mMPA处理的细胞中，早期凋亡细胞分别占2.4％，5.36％，14.2％和29.2％，提示用PA处理的L02细胞以剂量依赖性方式表现出细胞凋亡（图1.4，P<0.05）。

【参考文献】：
期刊论文
[1]Apoptosis and non-alcoholic fatty liver diseases[J]. Tatsuo Kanda,Shunichi Matsuoka,Motomi Yamazaki,Toshikatsu Shibata,Kazushige Nirei,Hiroshi Takahashi,Tomohiro Kaneko,Mariko Fujisawa,Teruhisa Higuchi,Hitomi Nakamura,Naoki Matsumoto,Hiroaki Yamagami,Masahiro Ogawa,Hiroo Imazu,Kazumichi Kuroda,Mitsuhiko Moriyama.  World Journal of Gastroenterology. 2018(25)
[2]17-beta-hydroxysteroid dehydrogenase 13 inhibits the progression and recurrence of hepatocellular carcinoma[J]. Jun Chen,Jian-Yong Zhuo,Fan Yang,Zhi-Kun Liu,Lin Zhou,Hai-Yang Xie,Xiao Xu,Shu-Sen Zheng.  Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2018(03)
[3]Change of intestinal mucosa barrier function in the progress of non-alcoholic steatohepatitis in rats[J]. Sheng Li, Wan-Chun Wu, Chi-Yi He, Zhen Han, Dao-You Jin, Lin Wang, Department of Gastroenterology, Yijishan Hospital, Wannan Medical College, Wuhu 24l00l, Anhui Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2008(20)
[4]Small intestinal bacteria overgrowth decreases small intestinalmotility in the NASH rats[J]. Wan-Chun Wu, Wei Zhao, Sheng Li, Department of Gastro-enterology, Yijishan Hospital, Wuhu 241000, Anhui Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2008(02)



本文编号：3526371