阿拉伯半乳聚糖适配子和结核分枝杆菌新抗原肽的筛选及其诊断价值评估

发布时间：2021-12-22 05:59

　　第一部分阿拉伯半乳聚糖适配子的筛选及诊断价值评估背景与目的:结核病是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）感染引起的慢性传染性疾病。MTB特有的细胞壁结构是由分枝菌酸、肽聚糖和阿拉伯半乳聚糖（arabinogalactan,AG）通过共价连接组成,对菌的生存和复制极其重要。AG连接细胞壁外层的分枝菌酸和内层的肽聚糖对维持细胞壁的完整性非常重要,且为分枝杆菌所特有。糖类抗体制备难度较大,目前尚无靶向AG的抗体,而通过指数富集配体系统进化（Systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX）技术筛选获得的适配子能与蛋白、病毒、细胞等不同靶标高亲和力结合。因此,本研究目的是通过SELEX技术筛选分枝杆菌AG的适配子,并初步应用于MTB的检测。方法体外构建合成一个含78个碱基的随机ssDNA文库,通过SELEX技术从随机ssDNA文库中筛选获得分枝杆菌AG的适配子库,将适配子库进行克隆、测序。通过DNAMAN软件分析适配子的结构,MEGA软件分析适配子的系统进化树,酶联寡核苷酸吸... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

琼脂糖凝胶电泳分析第1轮和第7轮筛选获得的ssDNA文库

第2章AG适配子的筛选及诊断价值评估11（30/33）的适配子为一个优势群，9.1%（3/33）的适配子表现出较大差异（图2.2A）。经过7轮筛选，与靶标结合的适配子确实得到很好的富集。适配子命名根据筛选过程编号（例如，适配子MAA1是筛选过程中第一个分枝杆菌AG的适配子）。所有的适配子均包含保守核酸序列，通过分析这些不同核心序列的适配子的序列演化发现各适配子的核心序列中有28个碱基的同源水平大于75%（图2.2B）。图2.2AG适配子的系统演变（A）适配子的系统进化树；（B）具有不同核心序列的适配子序列演化图。2.2.3AG适配子的亲和力和二级结构获得的33个适配子共有20种不同核心序列，将这20个不同核心序列的适配子进行与AG亲和力的鉴定。不同序列的适配子有着不一样的空间结构与AG结合能力不一，亲和力也不一，其中适配子MAA2显示和AG的亲和力最高，而MAA20最低。5个适配子（MAA2，MAA5，MAA8，MAA27，MAA28）与AG的亲和力大于1.0视为高亲和力适配子。在优势群适配子中，6个适配子序列和MAA5序列一样，为优势适配子，其中亲和力以MAA5最高。MAA5的核心结构如图2.3。33个适配子共有11种二级结构，其中8种均有茎环和口袋结构，这提示茎环和口袋结构可能是适配子和AG结合的结构基础（图2.4）。

适配子MAA5的核心序列二级结构图

【参考文献】：
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本文编号：3545883