静脉注射hBMP-2基因转染ADSCs干预兔骨质疏松性骨折的实验研究

发布时间：2021-12-30 16:21

　　目的:静脉注射用腺病毒载体转染人骨形态发生蛋白2（hBMP-2）基因的脂肪干细胞（ADSCs）于兔骨质疏松性骨折（OPF）模型体内,观察其对骨折愈合的修复作用。方法:1在新西兰大白兔颈项部提取适量脂肪组织,分离传代培养ADSCs至第3代。用腺病毒载体将hBMP-2基因转染至转染ADSCs组干细胞内,荧光显微镜下观察转染效率。10 d后逆转录酶聚合酶链反应法（RT-PCR）检测hBMP-2mRNA的表达水平,采用蛋白印迹杂交法（WB）检测hBMP-2蛋白的表达情况。2 48只新西兰大白兔采用双侧卵巢去势法,联合右侧股骨中下段2 mm骨缺损骨折法制备兔OPF模型。造模后随机分组法分为3组:转染干细胞组（16只,简称转染组）、未转染干细胞组（16只,简称空载组）、对照组（16只）;造模术后第3天开始静脉移植干细胞,每天1次,共3天。各组在移植后4周和8周时间点进行免疫组织化学法（IHC-P）检测血清骨生化4项;用X线摄片半定量评分法比较各组兔子骨质大体形态修复程度;HE染色方法了解各组兔子骨组织的病理变化;转染组行共聚焦显微镜示踪检测荧光标记蛋白表达情况,评估干细胞移植归巢效果。结果:1分离... 

【文章来源】：遵义医科大学贵州省

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

重组质粒Ad-hBMP-2测序鉴定图

图2双侧

遵义医科大学硕士学位论文杨显红232结果2.1兔ADSCs培养及流式细胞鉴定完全培养基培养ADSCs，原代细胞显微镜下观察多为圆形、椭圆形及不规则方形，12h后可见部分细胞贴壁生长，为长梭形，24h观察见细胞已全部贴壁生长，5d后见细胞生长达培养瓶面积的80%，细胞呈长梭形。经消化、传代后细胞3d可生长达培养瓶面积的80%，生殖速度较原代快，第2、3代细胞呈梭形，经3次传代，细胞形态稳定（如图3）。流式细胞仪检测第3代ADSCs结果显示：CD45的细胞表达3.2%，CD14的细胞表达0.46%，符合兔脂肪干细胞表面抗原的一般表达情况，可以确定经提取传代的细胞为ADSCs。（如图4）图3兔ADSCs的传代培养图（×100）a：原代ADSCs呈圆形、椭圆形及不规则方形生长；b：24小时后ADSCs全部贴壁生长；c：第2代ADSCs呈梭形，生殖速度较原代快；d：第3代ADSCs形态稳定，生殖速度快。abcd

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
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硕士论文
[1]腺病毒介导hBMP-2转染ADSCs治疗兔骨质疏松性骨折的实验研究[D]. 闵巍.遵义医学院 2017



本文编号：3558565