静态与流动对NDM-1和氨曲南的互作影响研究

发布时间：2022-01-07 05:07

　　新德里金属-β-内酰胺酶1（New Delhi metallo-beta-lactamase-1;NDM-1）是一种金属离子依赖的-β-内酰胺酶（metal-lactamase,MBL）,它可水解几乎所有β-内酰胺类抗生素但极难水解氨曲南（Aztreonam）。因此联合应用氨曲南、头孢他啶-阿维巴坦治疗丝氨酸β-内酰胺酶（SBL）及金属-β-内酰胺酶（MBL）共表达表达的肠杆菌及假单胞铜绿杆菌在临床治疗和体外敏感性实验都观察到了好的结果。然而氨曲南的治疗机制仍然不完全清楚。另一方面,近期研究结果表明NDM-1在高浓度条件下可以水解氨曲南,因此NDM-1对氨曲南是否表现出条件依赖性耐药,还有什么条件可导致NDM-1对氨曲南发生水解而出现耐药也在很大程度上不清楚。在本研究中我们以纯化的NDM-1、固相有NDM-1的酶珠（NDM-1酶珠）及装载有NDM-1酶珠的酶热传感器（NDM-1酶热传感器）研究NDM-1与氨曲南在静态与连续流动条件下两者相互作用对NDM-1的耐药活性影响。首先在相对静态的试管内研究NDM-1对抗生素的水解活性时我们发现氨曲南能够显著抑制NDM-1对共处理的硝噻吩或美罗培... 

【文章来源】：山西大学山西省

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

评价氨曲南对NDM-1水解头孢硝噻吩和美罗培南的影响

第二章氨曲南竞争性抑制NDM-1对β-内酰胺类抗生素的水解11（54.7±13.3%相对于4.6±2.3%），但与第一次处理时只加入青霉素G的酶珠在第二次处理时对青霉素G的水解率（92.5±4.4%）相比仍然明显较低（图2.3中标记的第二次处理数据部分）。而且对第二次处理后的酶珠再次充分清洗后，并以与第二次处理酶珠相同的方式以5.4mM青霉素G第三次处理各酶珠。发现与第一次处理时只加入青霉素G处理的酶珠相比第一次处理时加入氨曲南共处理的酶珠对青霉素G的水解率仍然低30%左右（图2.3中标记的第三次处理数据部分）。这些数据表明与青霉素G单独处理NDM-1酶珠不同，以氨曲南与青霉素G共同处理的NDM-1酶珠即使经过2轮的清洗仍然只能对新加入的青霉素G进行部分水解。所以氨曲南是通过与NDM-1形成稳定的复合物占据了头孢硝噻吩、美罗培南及青霉素G与NDM-1结合的位点从而对NDM-1水解这些抗生素起到了强烈的抑制作用。图2.3评价氨曲南对NDM-1酶珠水解青霉素G的影响Fig.2.3EvaluationofeffectofAztreonamonhydrolysisofPenicillinGbyNDM-1immobilizedCPGbeads-2.4.4讨论近年来联合应用氨曲南、头孢他啶-阿维巴坦治疗MBL表达的强耐药肠杆菌及假单胞铜绿杆菌在临床治疗和体外敏感性实验都观察到了好的结果[25]。然而其治疗机制仍然不完全清楚。本研究中我们首先以分光光度计的方法分析NDM-1对氨曲南的水解，但发现即使在相对高浓度NDM-1处理16个小时的条件下氨曲南也没发生水解。这些数据支持氨曲南对MBL稳定的报道。然后发现以氨曲南共处理能够显著抑制NDM-1对头孢硝噻吩和美罗培南的水解，且这种抑制呈剂量依赖性和时间依赖性（图2.2）。这些数据表明氨曲南可以抑制NDM-1对头孢类和碳青霉烯类β-内酰胺类抗生素的水解。抑制活性随着氨曲南的

静态与流动对NDM-1和氨曲南的互作影响研究20分钟稳定基线；（4）待基线稳定后，将31.25mg/L（每个浓度三次重复）的青霉素缓慢注入酶热传感器系统，等待5min，平稳的基线出现峰值回归平稳后，可上下一个样品。如此反复检测不同浓度的青霉素。美罗培南依照检测青霉素G的方法，重低浓度至高浓度依此检测；（5）实验结束，使用含有EDTA和ZnSO4的1×PBS以10速冲洗仪器25min，之后关闭仪器；（6）记录峰值的数据，每一种浓度的抗生素峰值取平均值，统计所得数据，绘制标准曲线。3.4结果与讨论3.4.1NDM-1酶热传感器系统模式图酶热传感器的原理为，通过磷酸盐缓冲液和含有抗生素浓度的待测溶液与酶柱中固定化的酶化学反应产生的热量与含有抗生素溶液的抗生素浓度成正比，这种热信号通过色谱系统转化为易于观察的峰值的高低。抗生素含量越高，峰值越高（如图3.1；3.2）。图3.1酶热传感器模式图


本文编号：3573879