磁性纳米粒介导沉默PI3Kγ基因调控肿瘤相关巨噬细胞抗小鼠肺癌细胞效应的研究

发布时间：2022-01-17 04:00

　　目的:探讨超顺磁性Fe₃O₄纳米粒子（superparamagnetic iron oxide nanoparticles,SPIONs）介导的磷脂酰肌醇3激酶γ（phosphatidylinositol3 kinaseγ,PI3Kγ）抑制表达调控的肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophages,TAMs）对小鼠Lewis肺癌细胞（lewis lung carcinoma,LLC）增殖和凋亡的影响。方法:1.构建3条能启动巨噬细胞（Macrophages,MФ）特异性表达PI3Kγ催化亚基p100（phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit gamma,PIK3CG）siRNA的pSilencer-EGFP-SP-p110质粒并转染小鼠RAW264.7细胞,通过荧光显微镜观察各组细胞荧光蛋白的表达情况,通过Real-time PCR和Western blot检测细胞转染质粒后表达siRNA的能力及其对PI3Kγp110基因沉默的效... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：85 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

pSilencer-EGFP-SP-p110重组质粒构建示意图

重庆医科大学硕士研究生学位论文28图1-2pSilencer-EGFP-SP-p110重组质粒的单酶切鉴定Fig.1-2IdentificationofpSilencer-EGFP-SP-p110recombinantplasmidbyrestrictionenzymedigestion2.1.2测序鉴定利用pSilencer4.1-CMVneo载体的通用测序引物分别对三条重组质粒S1、S2、S3中的发夹结构PI3Kγp100siRNA的模板DNA进行序列分析。测序报告如下：（1）pS-EGFP-SP-p110-1（S1）AAGCTTGAATTCCAGAAAGTCAAAGTGAGCAGGATTTTCTCTTGAAAAATCCTGCTCACTTTGACTTTCTGGGATCC（2）pS-EGFP-SP-p110-2（S2）AAGCTTGAATTCAGTATGACGTCAGTTCCCAAGTTATTCTCTTGAAATAACTTGGGAACTGACGTCATACTGGATCC（3）pS-EGFP-SP-p110-2（S3）AAGCTTGAATTCCAGAGACAGGAAACCTATTTCATATTCTCTTGAAATATGAAATAGGTTTCCTGTCTCTGGGATCC测序结果表明：三条重组质粒S1、S2、S3中插入的针对PI3Kγp100siRNA的模板序列均与前期设计的寡核苷酸链序列完全一致，表明三条重组质粒均构建成功。

重庆医科大学硕士研究生学位论文292.2RAW264.7细胞转染S1、S2、S3重组质粒后的荧光蛋白表达情况三条重组质粒转染RAW264.7细胞24h后，通过倒置荧光显微镜观察到重组质粒S1、S2、S3转染的细胞均可表达绿色荧光蛋白（图1-3），且重组质粒S1转染的细胞荧光密度相对于重组质粒S2和S3转染的细胞高。图1-3荧光显微镜观察RAW264.7细胞转染重组质粒后荧光的表达Fig.1-3FluorescenceexpressionofRAW264.7cellstransfectedwithrecombinantplasmidwasobservedbyfluorescencemicroscopeA:重组质粒转染RAW264.7细胞24h后（荧光显微镜,100×）；B:重组质粒转染RAW264.7细胞24h后（相差显微镜,100×）A:theplasmidtransfectedcellsunderfluorescencemicroscope(100×);B:theplasmidtransfectedcellsunderordinaryopticalmicroscopy(100×)2.3重组质粒转染的RAW264.7细胞PI3Kγp110mRNA的转录水平Real-timePCR结果显示（图1-4），重组质粒转染RAW264.7细胞24h后，五组细胞PI3Kγp110mRNA的相对转录水平为：S1转染组（0.35±0.21）＜S3转染组（0.36±0.21）＜S2转染组（0.43±0.16）＜空质粒对照组（0.71±0.26）＜空白对照组（定为1），通过组间比较，三条重组质粒S1、S2、S3转染组与空质粒对照组

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3594000