tdTomato转基因小鼠的建系及其在细胞示踪方面的应用研究
发布时间：2022-02-05 07:50
目的:1.构建稳定表达的tandem-dimer Tomato（tdTomato）转基因小鼠并建系,观察其全身多器官组织的荧光表达情况,检测其生理生化指标有无异常,确保其符合实验小鼠的标准;2.提取tdTomato转基因小鼠的神经干细胞,观察其在活体细胞移植示踪实验中的荧光表达情况。初步尝试双色异体干细胞共培养实验,意在探究离体细胞培养以及分化时荧光表达的稳定性。方法:本实验分为两个部分。第一部分,使用Gateway clone技术构建tdTomato载体后,将过表达载体通过DNA显微注射法注入受精卵,然后移植至假孕母鼠体内,待其发育足月后自然生产。使用双向鉴定法鉴定并挑取阳性tdTomato转基因小鼠,置于山西医科大学实验动物中心的屏障环境中进行饲养,交叉配种繁殖并建系。送检生理生化指标检测,与正常野生小鼠进行统计学分析。第二部分,提取tdTomato转基因小鼠的神经干细胞培养至3代,随后移植到脊髓损伤小鼠模型的脊髓损伤部位进行示踪观察。另提取eGFP转基因小鼠的骨髓间充质干细胞和神经干细胞分别与tdTomato转基因小鼠的神经干细胞进行双色异体干细胞共培养实验,跟踪拍摄干细胞分化情...
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
琼脂糖凝胶电泳鉴定筛选阳性载体质粒结果图
山西医科大学硕士学位论文11图1-2A：tdTomato转基因新生小鼠阳性与阴性在激发光下对比结果；B：tdTomato转基因小鼠与WT小鼠的鼠尾在正常光源下和激发光下的对比。提取tdTomato转基因小鼠的鼠尾DNA，经过凝胶电泳分析表明阳性结果可见在200~400bp之间有双条带，阴性结果仅在300~400bp之间有单条带（图1-3）。经双向鉴定结果显示，在OF-500AC激发灯头下呈现阳性结果的tdTomato转基因小鼠，其鼠尾DNA凝胶电泳鉴定结果亦为阳性。图1-3：凝胶电泳的鉴定结果的阳性与阴性。
山西医科大学硕士学位论文11图1-2A：tdTomato转基因新生小鼠阳性与阴性在激发光下对比结果；B：tdTomato转基因小鼠与WT小鼠的鼠尾在正常光源下和激发光下的对比。提取tdTomato转基因小鼠的鼠尾DNA，经过凝胶电泳分析表明阳性结果可见在200~400bp之间有双条带，阴性结果仅在300~400bp之间有单条带（图1-3）。经双向鉴定结果显示，在OF-500AC激发灯头下呈现阳性结果的tdTomato转基因小鼠，其鼠尾DNA凝胶电泳鉴定结果亦为阳性。图1-3：凝胶电泳的鉴定结果的阳性与阴性。
【参考文献】：
期刊论文
[1]转基因小鼠脊髓源神经干细胞移植于脊髓损伤模型后的成活、分化、迁移[J]. 王晶,王春芳,李宵,李鹏飞,田峰,高渊涛. 中华实验外科杂志. 2017 (06)
[2]Updates in the pathophysiological mechanisms of Parkinson’s disease: Emerging role of bone marrow mesenchymal stem cells[J]. Hanaa H Ahmed,Ahmed M Salem,Hazem M Atta,Emad F Eskandar,Abdel Razik H Farrag,Mohamed A Ghazy,Neveen A Salem,Hadeer A Aglan. World Journal of Stem Cells. 2016(03)
[3]EGFP转基因小鼠建系及其脊髓源神经干细胞应用前景的探讨[J]. 李宵,王春芳,李鹏飞,王晶,闫肖卿,田峰. 中国组织化学与细胞化学杂志. 2015(02)
[4]干细胞标记及示踪技术的应用研究[J]. 牛艳君,李莹,白仲添,吕青芳,严祥. 基础医学与临床. 2015(04)
[5]小鼠脊髓损伤模型的建立及神经干细胞移植后运动功能恢复情况的研究[J]. 张海滨,王春芳,李鹏飞,刘佳,张振山,呼钟理,李宵. 中国组织化学与细胞化学杂志. 2014(02)
[6]人骨髓间充质干细胞分化为运动神经元过程中Nestin与Hb9表达的研究[J]. 张振山,王春芳,胡风云,李鹏飞,张海滨,李宵. 中国组织化学与细胞化学杂志. 2014(01)
[7]Effects of lateral ventricular transplantation of bone marrow-derived mesenchymal stem cells modified with brain-derived neurotrophic factor gene on cognition in a rat model of Alzheimer’s disease[J]. Ping Zhang1, Gangyong Zhao2, Xianjiang Kang3, Likai Su1 1Department of Neurology, Affiliated Hospital of Hebei University, Baoding 071000, Hebei Province, China 2Research Center for Bioengineering Technology, Hebei University, Baoding 071000, Hebei Province, China 3College of Life Science, Hebei University, Baoding 071000, Hebei Province, China. Neural Regeneration Research. 2012(04)
[8]miR-124 and miR-128 differential expression in bone marrow stromal cells and spinal cord-derived neural stem cells[J]. Chunfang Wang1, Hongen Wei1, 2, Chuansen Zhang2, Pengfei Li1, Fei Wang1, Shufeng Han3 1Department of Biotechnology, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China 2Department of Anatomy, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China 3Department of Orthopedics, First Affiliated Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China. Neural Regeneration Research. 2010(11)
[9]慢病毒载体法制备红色荧光蛋白转基因小鼠[J]. 贾俊双,肖高芳,林晓琳,张晟,姚志芳,杜文婷,申红芬,刘科,饶子亮,孙妍,姚开泰,肖东. 中国比较医学杂志. 2010(02)
[10]骨髓间充质干细胞移植对阿尔茨海默病大鼠行为学的影响[J]. 李海生,陈振锋,李海英. 中国组织工程研究与临床康复. 2009(49)
本文编号：3614857
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
琼脂糖凝胶电泳鉴定筛选阳性载体质粒结果图
山西医科大学硕士学位论文11图1-2A：tdTomato转基因新生小鼠阳性与阴性在激发光下对比结果；B：tdTomato转基因小鼠与WT小鼠的鼠尾在正常光源下和激发光下的对比。提取tdTomato转基因小鼠的鼠尾DNA，经过凝胶电泳分析表明阳性结果可见在200~400bp之间有双条带，阴性结果仅在300~400bp之间有单条带（图1-3）。经双向鉴定结果显示，在OF-500AC激发灯头下呈现阳性结果的tdTomato转基因小鼠，其鼠尾DNA凝胶电泳鉴定结果亦为阳性。图1-3：凝胶电泳的鉴定结果的阳性与阴性。
山西医科大学硕士学位论文11图1-2A：tdTomato转基因新生小鼠阳性与阴性在激发光下对比结果；B：tdTomato转基因小鼠与WT小鼠的鼠尾在正常光源下和激发光下的对比。提取tdTomato转基因小鼠的鼠尾DNA，经过凝胶电泳分析表明阳性结果可见在200~400bp之间有双条带，阴性结果仅在300~400bp之间有单条带（图1-3）。经双向鉴定结果显示，在OF-500AC激发灯头下呈现阳性结果的tdTomato转基因小鼠，其鼠尾DNA凝胶电泳鉴定结果亦为阳性。图1-3：凝胶电泳的鉴定结果的阳性与阴性。
【参考文献】：
期刊论文
[1]转基因小鼠脊髓源神经干细胞移植于脊髓损伤模型后的成活、分化、迁移[J]. 王晶,王春芳,李宵,李鹏飞,田峰,高渊涛. 中华实验外科杂志. 2017 (06)
[2]Updates in the pathophysiological mechanisms of Parkinson’s disease: Emerging role of bone marrow mesenchymal stem cells[J]. Hanaa H Ahmed,Ahmed M Salem,Hazem M Atta,Emad F Eskandar,Abdel Razik H Farrag,Mohamed A Ghazy,Neveen A Salem,Hadeer A Aglan. World Journal of Stem Cells. 2016(03)
[3]EGFP转基因小鼠建系及其脊髓源神经干细胞应用前景的探讨[J]. 李宵,王春芳,李鹏飞,王晶,闫肖卿,田峰. 中国组织化学与细胞化学杂志. 2015(02)
[4]干细胞标记及示踪技术的应用研究[J]. 牛艳君,李莹,白仲添,吕青芳,严祥. 基础医学与临床. 2015(04)
[5]小鼠脊髓损伤模型的建立及神经干细胞移植后运动功能恢复情况的研究[J]. 张海滨,王春芳,李鹏飞,刘佳,张振山,呼钟理,李宵. 中国组织化学与细胞化学杂志. 2014(02)
[6]人骨髓间充质干细胞分化为运动神经元过程中Nestin与Hb9表达的研究[J]. 张振山,王春芳,胡风云,李鹏飞,张海滨,李宵. 中国组织化学与细胞化学杂志. 2014(01)
[7]Effects of lateral ventricular transplantation of bone marrow-derived mesenchymal stem cells modified with brain-derived neurotrophic factor gene on cognition in a rat model of Alzheimer’s disease[J]. Ping Zhang1, Gangyong Zhao2, Xianjiang Kang3, Likai Su1 1Department of Neurology, Affiliated Hospital of Hebei University, Baoding 071000, Hebei Province, China 2Research Center for Bioengineering Technology, Hebei University, Baoding 071000, Hebei Province, China 3College of Life Science, Hebei University, Baoding 071000, Hebei Province, China. Neural Regeneration Research. 2012(04)
[8]miR-124 and miR-128 differential expression in bone marrow stromal cells and spinal cord-derived neural stem cells[J]. Chunfang Wang1, Hongen Wei1, 2, Chuansen Zhang2, Pengfei Li1, Fei Wang1, Shufeng Han3 1Department of Biotechnology, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China 2Department of Anatomy, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China 3Department of Orthopedics, First Affiliated Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China. Neural Regeneration Research. 2010(11)
[9]慢病毒载体法制备红色荧光蛋白转基因小鼠[J]. 贾俊双,肖高芳,林晓琳,张晟,姚志芳,杜文婷,申红芬,刘科,饶子亮,孙妍,姚开泰,肖东. 中国比较医学杂志. 2010(02)
[10]骨髓间充质干细胞移植对阿尔茨海默病大鼠行为学的影响[J]. 李海生,陈振锋,李海英. 中国组织工程研究与临床康复. 2009(49)
本文编号：3614857
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