TRIM28在抗癌药硼替佐米肿瘤耐药性产生中的机制和功能研究
发布时间:2022-02-09 09:52
近年来,人类对癌症发病机制不断深入研究,对于肿瘤发生的细胞与分子机制逐渐清晰,许多潜在的干预靶点得到了发现和确认,并不断推出许多新型抗癌药物应用于临床,不仅延长了癌症病人的生存期,同时也极大改善了他们的生活质量。但是肿瘤细胞对化疗的耐药性限制了大多数抗癌药物的治疗效果,因其涉及许多机制,依然是癌症治疗中的主要挑战。所以,发现并阐明新的肿瘤细胞耐药性机制,针对新的靶点设计药物进而克服肿瘤耐药性,这对于更有效的肿瘤治疗具有重要意义。肿瘤耐药性是硼替佐米(Bortezomib,BTZ)治疗肿瘤的关键难题,而我们新近发现三基序蛋白28(Tripartite Motif Containing 28,TRIM28)可能在抗癌药BTZ耐药产生中具有一定的作用,所以本研究将构建稳定敲低/过表达TRIM28细胞系,利用免疫印迹、q-PCR等方法探讨在BTZ药物压力下,TRIM28调控肿瘤细胞BTZ耐药的产生。结果显示,不论在转录水平还是在蛋白质水平,TRIM28上调20S蛋白酶体的表达,说明TRIM28对蛋白酶体是一个正调控作用。此外,为进一步阐明TRIM28对蛋白酶体的调控机制,我们使用稳定敲低/过表...
【文章来源】:中国科学院大学(中国科学院深圳先进技术研究院)广东省
【文章页数】:60 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
成功构建敲低/过表达TRIM28细胞系A-B.免疫印迹分析HCT116、HepG2及MCF7细胞中分别稳定表达对照或低表达
第3章结果31图3.2TRIM28在mRNA水平上调蛋白酶体特定亚基A.HCT116细胞中分别稳定表达对照或F-TRIM28,用BTZ(20nM)处理8h,qPCR检测蛋白酶体核心复合物(20S)及调节复合物(19S)各个亚基基因水平变化。B.HepG2、MCF7细胞中用BTZ(150nM/100nM)处理8h,qPCR检测蛋白酶体核心复合物(20S)活性亚基β1,β2,β5基因水平变化。C.MCF7细胞中分别稳定表达对照或过表达TRIM28,用DMSO处理8h,qPCR检测蛋白酶体核心复合物(20S)活性亚基β1,β2,β5基因水平变化。D.MCF7细胞中分别稳定表达对照或敲低TRIM28,分别用DMSO和BTZ(100nM)处理8h,qPCR检测蛋白酶体核心复合物(20S)活性亚基β1,β2,β5基因水平变化。呈现的数据代表平均值±SEM(n=3),显著性差异的确定采用two-wayANOVA检验分析,其中与对照相比,*表示P<0.05;**表示P<0.01;***表示P<0.005。Figure3.2Proteasome-specificsubunitsareupregulatedbyTRIM28atthemRNAlevelA.HCT116cellsstablyexpressedcontrolorF-TRIM28,respectively,treatedwithBTZ(20nM)for8hours,qPCRwasusedtodetectchangesingenelevelsofeachsubunitof
第3章结果33图3.3在蛋白水平,TRIM28上调20S蛋白酶体的表达A.MCF7细胞用BTZ(100nM)处理8h,免疫印迹分析MCF7细胞中20S蛋白酶体,TRIM28蛋白的表达,其中β-tubulin为内参蛋白;B.HCT116细胞中分别稳定表达对照或低表达TRIM28蛋白,用不同浓度BTZ(50nM,100nM)处理8h,免疫印迹分析HCT116细胞中20S蛋白酶体,其中β-tubulin为内参蛋白。C.MCF7细胞中分别稳定表达对照或过表达TRIM28蛋白,用BTZ(100nM)处理8h,免疫印迹分析MCF7细胞中20S蛋白酶体,其中GAPDH为内参蛋白。蛋白灰度分析统计图均在右侧显示。Figure3.3TRIM28up-regulates20SproteasomeexpressionattheproteinlevelA.MCF7cellsweretreatedwithdifferentconcentrationsofBTZ(100nM)for8hours.Theexpressionof20Sproteasomes、TRIM28inMCF7cellswereanalyzedbywestern
本文编号:3616795
【文章来源】:中国科学院大学(中国科学院深圳先进技术研究院)广东省
【文章页数】:60 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
成功构建敲低/过表达TRIM28细胞系A-B.免疫印迹分析HCT116、HepG2及MCF7细胞中分别稳定表达对照或低表达
第3章结果31图3.2TRIM28在mRNA水平上调蛋白酶体特定亚基A.HCT116细胞中分别稳定表达对照或F-TRIM28,用BTZ(20nM)处理8h,qPCR检测蛋白酶体核心复合物(20S)及调节复合物(19S)各个亚基基因水平变化。B.HepG2、MCF7细胞中用BTZ(150nM/100nM)处理8h,qPCR检测蛋白酶体核心复合物(20S)活性亚基β1,β2,β5基因水平变化。C.MCF7细胞中分别稳定表达对照或过表达TRIM28,用DMSO处理8h,qPCR检测蛋白酶体核心复合物(20S)活性亚基β1,β2,β5基因水平变化。D.MCF7细胞中分别稳定表达对照或敲低TRIM28,分别用DMSO和BTZ(100nM)处理8h,qPCR检测蛋白酶体核心复合物(20S)活性亚基β1,β2,β5基因水平变化。呈现的数据代表平均值±SEM(n=3),显著性差异的确定采用two-wayANOVA检验分析,其中与对照相比,*表示P<0.05;**表示P<0.01;***表示P<0.005。Figure3.2Proteasome-specificsubunitsareupregulatedbyTRIM28atthemRNAlevelA.HCT116cellsstablyexpressedcontrolorF-TRIM28,respectively,treatedwithBTZ(20nM)for8hours,qPCRwasusedtodetectchangesingenelevelsofeachsubunitof
第3章结果33图3.3在蛋白水平,TRIM28上调20S蛋白酶体的表达A.MCF7细胞用BTZ(100nM)处理8h,免疫印迹分析MCF7细胞中20S蛋白酶体,TRIM28蛋白的表达,其中β-tubulin为内参蛋白;B.HCT116细胞中分别稳定表达对照或低表达TRIM28蛋白,用不同浓度BTZ(50nM,100nM)处理8h,免疫印迹分析HCT116细胞中20S蛋白酶体,其中β-tubulin为内参蛋白。C.MCF7细胞中分别稳定表达对照或过表达TRIM28蛋白,用BTZ(100nM)处理8h,免疫印迹分析MCF7细胞中20S蛋白酶体,其中GAPDH为内参蛋白。蛋白灰度分析统计图均在右侧显示。Figure3.3TRIM28up-regulates20SproteasomeexpressionattheproteinlevelA.MCF7cellsweretreatedwithdifferentconcentrationsofBTZ(100nM)for8hours.Theexpressionof20Sproteasomes、TRIM28inMCF7cellswereanalyzedbywestern
本文编号:3616795
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