SO 2 对人血管平滑肌细胞microRNA表达谱的影响
发布时间：2022-02-21 19:30
二氧化硫（SO2）是一种有毒气体,也是主要的大气污染物之一,其主要来源于工业燃料的燃烧。流行病学研究表明,SO2的暴露与心血管疾病有关。高血压、冠状动脉疾病、动脉粥样硬化和充血性心力衰竭等心血管疾病是世界范围内的主要死亡原因,据世界卫生组织统计,2016年大约1790万人死于心血管疾病,占所有死亡比例的31%。MicroRNAs（miRNA,miR）是一类小分子内源性非编码RNA,通过与靶mRNA 3’UTR的序列特异性相互作用,介导靶mRNA的降解或翻译,发挥基因调控作用。据估计,miRNA可以介导30%以上的人类基因组,在细胞的多种生物学过程及多种疾病的发生发展过程中发挥着重要的作用。然而,miRNA是否参与了SO2引起的心血管疾病并不十分清楚。本研究采用miRNA高通量测序技术和RT-PCR技术筛选并验证SO2染毒人主动脉血管平滑肌细胞中差异表达的miRNA,共检出106个差异表达的miRNA,其中67个表达上调,39个表达下调;结合文献及测序结果,随机挑选5个可能与心血管疾病相关的miRNA...
【文章来源】：山西大学山西省
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 SO_2 概述
1.1.1 SO_2 的来源及污染现状
1.1.2 SO_2 的毒性
1.2 心血管疾病及血管平滑肌细胞
1.2.1 心血管疾病概述
1.2.2 血管平滑肌细胞概述
1.3 miRNA在心血管疾病中的作用
1.3.1 miRNA概述
1.3.2 miRNA在心血管疾病中的研究进展
1.4 课题的设立依据,研究意义以及内容
第二章 SO_2 染毒人主动脉血管平滑肌细胞的miRNA测序
2.1 前言
2.2 实验材料
2.2.1 主要仪器设备
2.2.2 主要试剂耗材
2.3 实验方法
2.3.1 细胞培养及染毒分组
2.3.2 CCK-8 检测细胞活力
2.3.3 样品制备
2.3.4 总RNA的提取与质检
2.3.5 miRNA文库的制备和测序
2.3.6 测序数据基础分析
2.3.7 与心血管疾病相关的差异miRNA的筛选及验证
2.4 实验结果
2.4.1 SO_2对VSMC的毒性分析
2.4.2 总RNA提取和质检结果
2.4.3 生物学样本重复性质控结果
2.4.4 小RNA库的测序结果分析
2.4.5 检出miRNA长度分布统计结果
2.4.6 碱基偏好性分析
2.4.7 miRNA差异表达分析
2.4.8 筛选得到差异miRNA的 RT-PCR验证结果
2.5 讨论
第三章 miRNA的靶基因预测与生物信息学分析
3.1 前言
3.2 实验方法
3.2.1 miRNA的靶基因预测
3.2.2 miRNA靶基因GO功能分析
3.2.3 miRNA靶基因KEGG通路分析
3.3 实验结果
3.3.1 miRNA靶基因分析
3.3.2 miRNA靶基因GO功能富集结果
3.3.3 miRNA靶基因KEGG通路富集结果
3.4 讨论
第四章 Hsa-miR-10b-3p与 PPP3CC的靶向关系鉴定
4.1 前言
4.2 实验材料
4.2.1 主要仪器设备
4.2.2 主要试剂耗材
4.3 实验方法
4.3.1 hsa-miR-10b-3p靶基因预测
4.3.2 目的片段序列的设计及PCR钓取
4.3.3 琼脂凝胶回收与纯化
4.3.4 双酶切primGLO载体
4.3.5 目的片段与载体连接
4.3.6 重组质粒的提取与检测鉴定
4.3.7 细胞转染及双荧光素酶报告基因活性检测
4.4 实验结果
4.4.1 hsa-miR-10b-3p靶基因预测
4.4.2 野生型和突变型载体的构建与鉴定
4.4.3 双荧光素酶报告基因
4.5 讨论
第五章 结论
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简况及联系方式
【参考文献】：
期刊论文
[1]《中国心血管病报告2018》概要[J]. 胡盛寿,高润霖,刘力生,朱曼璐,王文,王拥军,吴兆苏,李惠君,顾东风,杨跃进,郑哲,陈伟伟. 中国循环杂志. 2019(03)
[2]microRNA调控平滑肌细胞分化和表型转换的分子机制研究进展[J]. 张莎,任安经,吴弘. 医学研究杂志. 2017(11)
博士论文
[1]MicroRNA-1178调控胰腺癌恶性生物学行为的研究[D]. 曹喆.北京协和医学院 2017
本文编号：3637908
【文章来源】：山西大学山西省
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 SO_2 概述
1.1.1 SO_2 的来源及污染现状
1.1.2 SO_2 的毒性
1.2 心血管疾病及血管平滑肌细胞
1.2.1 心血管疾病概述
1.2.2 血管平滑肌细胞概述
1.3 miRNA在心血管疾病中的作用
1.3.1 miRNA概述
1.3.2 miRNA在心血管疾病中的研究进展
1.4 课题的设立依据,研究意义以及内容
第二章 SO_2 染毒人主动脉血管平滑肌细胞的miRNA测序
2.1 前言
2.2 实验材料
2.2.1 主要仪器设备
2.2.2 主要试剂耗材
2.3 实验方法
2.3.1 细胞培养及染毒分组
2.3.2 CCK-8 检测细胞活力
2.3.3 样品制备
2.3.4 总RNA的提取与质检
2.3.5 miRNA文库的制备和测序
2.3.6 测序数据基础分析
2.3.7 与心血管疾病相关的差异miRNA的筛选及验证
2.4 实验结果
2.4.1 SO_2对VSMC的毒性分析
2.4.2 总RNA提取和质检结果
2.4.3 生物学样本重复性质控结果
2.4.4 小RNA库的测序结果分析
2.4.5 检出miRNA长度分布统计结果
2.4.6 碱基偏好性分析
2.4.7 miRNA差异表达分析
2.4.8 筛选得到差异miRNA的 RT-PCR验证结果
2.5 讨论
第三章 miRNA的靶基因预测与生物信息学分析
3.1 前言
3.2 实验方法
3.2.1 miRNA的靶基因预测
3.2.2 miRNA靶基因GO功能分析
3.2.3 miRNA靶基因KEGG通路分析
3.3 实验结果
3.3.1 miRNA靶基因分析
3.3.2 miRNA靶基因GO功能富集结果
3.3.3 miRNA靶基因KEGG通路富集结果
3.4 讨论
第四章 Hsa-miR-10b-3p与 PPP3CC的靶向关系鉴定
4.1 前言
4.2 实验材料
4.2.1 主要仪器设备
4.2.2 主要试剂耗材
4.3 实验方法
4.3.1 hsa-miR-10b-3p靶基因预测
4.3.2 目的片段序列的设计及PCR钓取
4.3.3 琼脂凝胶回收与纯化
4.3.4 双酶切primGLO载体
4.3.5 目的片段与载体连接
4.3.6 重组质粒的提取与检测鉴定
4.3.7 细胞转染及双荧光素酶报告基因活性检测
4.4 实验结果
4.4.1 hsa-miR-10b-3p靶基因预测
4.4.2 野生型和突变型载体的构建与鉴定
4.4.3 双荧光素酶报告基因
4.5 讨论
第五章 结论
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简况及联系方式
【参考文献】：
期刊论文
[1]《中国心血管病报告2018》概要[J]. 胡盛寿,高润霖,刘力生,朱曼璐,王文,王拥军,吴兆苏,李惠君,顾东风,杨跃进,郑哲,陈伟伟. 中国循环杂志. 2019(03)
[2]microRNA调控平滑肌细胞分化和表型转换的分子机制研究进展[J]. 张莎,任安经,吴弘. 医学研究杂志. 2017(11)
博士论文
[1]MicroRNA-1178调控胰腺癌恶性生物学行为的研究[D]. 曹喆.北京协和医学院 2017
本文编号：3637908
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/mpalunwen/3637908.html
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