CTRP13通过CaMKKβ/AMPK信号通路改善高糖诱导的肝窦内皮细胞功能障碍

发布时间：2022-04-27 22:18

　　目的本研究旨在探讨补体C1q/TNF相关蛋白13（C1q/TNF-related protein 13,CTRP13）对高糖诱导的大鼠肝窦内皮细胞功能障碍的影响作用及相关信号途径。方法培养大鼠肝窦内皮细胞（rat liver sinusoidal endothelial cells,rLSECs）,构建慢病毒CTRP13过表达载体（lentiviral CTRP13 overexpression vector,LV-CTRP13）并转染rLSECs。体外培养rLSECs并用高浓度葡萄糖（25 mM,24 h）处理,分别使用CaMKKβ抑制剂STO-609与AMPK抑制剂Compound C进行干预。MTT比色法用于检测rLSECs活力。采用RT-PCR和Western blotting技术检测CTRP13、CaMKKβ、AMPK、LN和CAV-1的表达水平。建立糖尿病性脂肪肝大鼠模型,使用HE染色和六胺银染色观察模型组大鼠肝脏的组织病理学特征,用免疫组织化学方法检测大鼠肝脏组织的CTRP13表达。采用SPSS 21.0软件对实验数据进行统计学分析。结果高糖作用下,rLSECs内CTRP... 

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
英文缩略词对照表
前言
第1章 材料和方法
    1.1 实验材料
        1.1.1 主要实验试剂
        1.1.2 主要仪器和设备
        1.1.3 主要工作液配置
    1.2 实验方法
        1.2.1 实验细胞的培养
        1.2.2 慢病毒过表达载体的构建和转染
        1.2.3 四甲基偶氮唑蓝(Methylthiazolylterazolium,MTT)比色法检测大鼠肝窦内皮细胞的活力
        1.2.4 qRT-PCR检测mRNA的表达水平
        1.2.5 蛋白免疫印迹方法检测蛋白表达水平
        1.2.6 糖尿病性脂肪肝大鼠模型的建立
    1.3 统计学方法
第2章 实验结果
    2.1 大鼠肝窦内皮细胞的培养
    2.2 高糖状态下rLSECs内 CTRP13 的表达明显降低
    2.3 高糖状态下rLSECs内 LN和 CAV-1 的表达明显增加
    2.4 慢病毒CTRP13 过表达载体转染增加了rLSECs中 CTRP13 的表达
    2.5 LV-CTRP13 转染降低了rLSECs中高糖诱导的LN和 CAV-1 的表达
    2.6 MTT法测定大鼠肝窦内皮细胞的活力
    2.7 LV-CTRP13 转染通过激活AMPK信号通路抑制了LN和 CAV-1 的表达
    2.8 LV-CTRP13 转染通过激活CaMKKβ活化转染细胞中的AMPK信号通路
    2.9 糖尿病性脂肪肝大鼠肝组织病理学特征
    2.10 糖尿病性脂肪肝大鼠肝脏基底膜的变化
    2.11 糖尿病性脂肪肝大鼠肝脏中CTRP13 的表达
第3章 讨论
第4章 结论
参考文献
综述
    综述参考文献
致谢
在学期间主要研究成果



本文编号：3649258