线粒体蛋白Miner2的表达、纯化及其性质研究

发布时间：2022-07-02 12:40

　　铁硫（Fe-S）蛋白在铁-氧传感器,酶和基因表达调控中起着至关重要的作用。NEET蛋白属于独特的铁硫（Fe-S）蛋白家族,可调节铁和活性氧的体内稳态,并参与癌症、糖尿病、神经变性和衰老的进程。在人类线粒体中,NEET蛋白包括:mitoNEET（mNT）,营养剥夺自噬1（NAF-1）和线粒体内NEET蛋白（Miner2）。mNT是结合抗2型糖尿病吡格列酮药物的蛋白,NAF-1蛋白的表达抑制会导致寿命缩短,NAF-1和mNT的骨架折叠与植物的同型二聚体NEET蛋白（At-NEET）相似。尽管发现Miner2蛋白在肺癌,乳腺癌和其他类型的癌症中高表达,但Miner2蛋白在线粒体中的功能了解甚少,所以本文研究Miner2蛋白的相关性质。首先,Miner2蛋白表达与纯化。利用分子生物学方法,将重组质粒pET22b-Miner2（Δ35）转入大肠杆菌（E.coli）BL21中,经IPTG（0.3 mM）诱导获得了该蛋白的可融性表达,经Ni-NTA亲和层析、CM阳离子交换层析多步纯化后,得到了比较纯的目标蛋白。为该蛋白的化学性质研究准备了必要的材料。其次,Miner2蛋白[2Fe-2S]簇稳定性研究... 

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
第一章 综述
    1.1 铁硫蛋白
        1.1.1 铁硫蛋白的概述
        1.1.2 铁硫蛋白的重要性
    1.2 [2Fe-2S]蛋白
        1.2.1 NEET蛋白的定位与分类
        1.2.2 NEET蛋白独特的结构
    1.3 NEET蛋白家族
        1.3.1 NEET蛋白简介
        1.3.2 NEET蛋白的结构
        1.3.3 NEET蛋白[2Fe-2S]簇结合域
        1.3.4 NEET蛋白的功能
    1.4 本课题研究意义
第二章 Miner2蛋白的表达与纯化
    2.1 引言
    2.2 材料
        2.2.1 主要试剂
        2.2.2 主要仪器
        2.2.3 溶液的配置
    2.3 实验方法
        2.3.1 Miner2 蛋白的表达
        2.3.2 Miner2 蛋白的纯化
    2.4 结果与讨论
        2.4.1 Miner2 蛋白的表达
        2.4.2 Miner2 蛋白的纯化
        2.4.3 Miner2 蛋白的表征
    2.5 结论
第三章 Miner2 蛋白[2Fe-2S]簇稳定性研究
    3.1 引言
    3.2 材料
        3.2.1 主要试剂
        3.2.2 主要仪器
    3.3 方法
        3.3.1 紫外-吸收光谱测定
        3.3.2 荧光光谱测定
    3.4 结果与讨论
        3.4.1 pH对 Miner2 蛋白[2Fe-2S]簇稳定性的影响
        3.4.2 不同离子强度下Miner2 蛋白[2Fe-2S]簇动力学研究
        3.4.3 温度对Miner2 蛋白[2Fe-2S]簇动力学研究
        3.4.4 Miner2 蛋白[2Fe-2S]簇在溶液中的存在形式
    3.5 结论
第四章 Miner2 蛋白氧化还原性研究
    4.1 引言
    4.2 材料
        4.2.1 主要试剂
        4.2.2 主要仪器
    4.3 方法
        4.3.1 紫外-吸收光谱测定
        4.3.2 电化学方法测定
    4.4 结果与讨论
        4.4.1 紫外-吸收光谱研究Miner2 蛋白的氧化还原性
        4.4.2 Miner2 蛋白的循环伏安研究
    4.5 结论
第五章 [2Fe-2S]簇对Miner2 蛋白构象的影响
    5.1 引言
    5.2 材料
        5.2.1 主要试剂
        5.2.2 主要仪器
    5.3 方法
        5.3.1 荧光光谱测定
        5.3.2 紫外光谱测定
        5.3.3 远紫外圆二色光谱(CD)测定
    5.4 结果与分析
        5.4.1 [2Fe-2S]簇对Miner2 蛋白构象的影响
        5.4.2 Miner2 蛋白与TNS作用的光谱
        5.4.3 TNS和 Miner2 蛋白Trp60 的能量转移
    5.5 结论
第六章 总结与展望
    6.1 结论
    6.2 展望
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简况及联系方式


【参考文献】：
硕士论文
[1]人中心蛋白3与金属离子结合的性质研究[D]. 楚雪峰.山西大学 2016



本文编号：3654379