合欢花减轻对乙酰氨基酚诱导的急性肝损伤的有效成分及其作用机制研究

发布时间：2022-08-07 22:43

　　目的:探究合欢花减轻APAP诱导的急性肝损伤的有效成分及其作用机制,为其在治疗APAP诱导的急性肝损伤方面的开发应用提供科学依据。方法:以人正常肝细胞L-02细胞为受试对象,采用MTT法检测合欢花不同部位提取物对APAP损伤的L-02细胞活力的影响,筛选有效部位。采用液质联用技术分析鉴定有效部位中的化学成分,选择主要成分进行活性筛选,并结合相关文献,确定有效成分。建立APAP急性肝损伤的BALB/c小鼠模型,灌胃给予小鼠不同浓度的有效成分,验证有效成分的体内抗急性肝损伤作用。观察有效成分对小鼠肝脏外观、脏器系数的影响;苏木精-伊红（H＆E）染色判断肝脏组织的病理生理结构变化;生化试剂盒检测小鼠血清中ALT、AST和LDH的含量,及小鼠肝组织匀浆中SOD、GSH、GSH-Px、CAT和MDA的含量;免疫组化染色检测小鼠肝脏中活性氧（ROS）、F4/80的变化;酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定小鼠血清中白细胞介素-6（IL-6）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量。建立APAP诱导的L-02细胞损伤模型,并设置对照组（Control）、药物组（Que）、模型组（APAP）和治疗组（A... 

【文章页数】：92 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
研究思路与技术路线
前言
第一章 文献综述
    1 药物性肝损伤
        1.1 概述
        1.2 APAP的肝毒性
        1.3 APAP肝毒性机制
        1.4 治疗对策
    2 合欢花
        2.1 合欢花化学成分
        2.2 合欢花药理作用研究
        2.3 总结
    3 槲皮苷
        3.1 抗氧化作用
        3.2 对中枢神经系统的作用
        3.3 对心血管系统作用
        3.4 抗炎镇痛作用
        3.5 抗肿瘤作用
        3.6 抗病毒作用
        3.7 抗糖尿病作用
        3.8 其他作用
        3.9 总结
    4 本论文研究意义
第二章 合欢花减轻APAP诱导的L-02 细胞损伤有效物质的筛选
    1 实验材料
        1.1 实验药材
        1.2 细胞株
        1.3 实验试剂
        1.4 实验仪器
        1.5 主要试剂的配置
    2 实验方法
        2.1 合欢花各部位的萃取分离
        2.2 细胞培养
        2.3 合欢花各部位对L-02 细胞活性的影响
        2.4 合欢花减轻APAP诱导的L-02 细胞损伤有效部位的筛选
        2.5 合欢花有效部位化学成分分析
        2.6 槲皮苷的分离纯化
        2.7 槲皮苷减轻APAP诱导的L-02 细胞损伤活性筛选
        2.8 数据统计分析
    3 实验结果
        3.1 合欢花各部位的萃取分离
        3.2 合欢花各部位活性筛选
        3.3 合欢花有效部位化学成分LC-MS分析
        3.4 槲皮苷的鉴定
        3.5 槲皮苷的活性筛选
    4 讨论
第三章 槲皮苷减轻APAP诱导的小鼠急性肝损伤药效学研究
    1 实验材料
        1.1 实验动物
        1.2 实验试剂
        1.3 实验仪器
    2 实验方法
        2.1 小鼠分组及给药
        2.2 取材
        2.3 组织样本石蜡包埋与切片
        2.4 肝脏组织的H&E染色
        2.5 冰冻切片免疫组化实验
        2.6 免疫组化实验
        2.7 小鼠血清中ALT、AST和 LDH水平的测定
        2.8 小鼠血清中IL-6和TNF-α水平的测定
        2.9 小鼠肝脏中SOD、GSH、GSH-Px、CAT和 MDA水平的测定
    3.实验结果
        3.1 槲皮苷对小鼠肝脏外观及肝脏脏器系数的影响
        3.2 槲皮苷对小鼠肝脏组织病理学的影响
        3.3 槲皮苷对血清中ALT、AST和 LDH水平的影响
        3.4 槲皮苷对小鼠炎症水平的影响
        3.5 槲皮苷对小鼠氧化应激水平的影响
    4 讨论
第四章 槲皮苷减轻APAP诱导的L-02 细胞损伤作用机制研究
    1 实验材料
        1.1 细胞株
        1.2 实验试剂
        1.3 实验仪器
        1.4 主要试剂的配置
    2 实验方法
        2.1 细胞的培养
        2.2 细胞内ROS水平的测定
        2.3 细胞线粒体内NADH脱氢酶活性的测定
        2.4 鱼藤酮对槲皮苷药效影响的测定
        2.5 蛋白免疫印迹法检测L-02 细胞中NADH脱氢酶的表达
        2.6 数据统计分析
    3 实验结果
        3.1 槲皮苷对细胞内ROS水平的影响
        3.2 槲皮苷对细胞线粒体中NADH脱氢酶活性的影响
        3.3 鱼藤酮对槲皮苷药效的影响
        3.4 槲皮苷对NADH脱氢酶表达的影响
    4 讨论
结语与创新
参考文献
研究生在读期间主要研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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[3]基于UPLC-Q-Orbitrap MS法分析补肺益肾方的化学成分[J]. 黄海英,康俊丽,余亚辉,赵鹏,冯素香,杜燕,李建生.  分析测试学报. 2019(01)
[4]基于UPLC-LTQ-Orbitrap高分辨质谱的中药瓜蒌化学成分分析[J]. 李欣,唐力英,许静,于现阔,杨洪军,李德凤,张毅,范建伟,苏瑞强,吴宏伟,张琼.  中国实验方剂学杂志. 2019(01)
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[6]番石榴果实中黄酮类成分研究[J]. 彭财英,陈祥云,崔航青,黄应正,高映,舒积成.  江西中医药大学学报. 2017(03)
[7]合欢花水提物对抑郁模型大鼠认知功能及HPA轴的影响[J]. 李旻.  中医临床研究. 2017(04)
[8]合欢花镇静催眠作用的谱效关系研究[J]. 刘家荟,郭伟英.  中药材. 2016(07)
[9]合欢的不同部位挥发性成分比较研究[J]. 王丽梅,邱红汉,周涛.  中国药师. 2016(06)
[10]Evaluation of antiviral activities of Houttuynia cordata Thunb.extract,quercetin,quercetrin and cinanserin on murine coronavirus and dengue virus infection[J]. K.H.Chiow,M.C.Phoon,Thomas Putti,Benny K.H.Tan,Vincent T.Chow.  Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2016(01)

硕士论文
[1]合欢花黄酮对MK801诱导的精神分裂症模型大鼠学习能力的影响及其机制研究[D]. 杜志敏.新乡医学院 2014



本文编号：3671176