miR-31通过靶向SATB2促进结肠炎的机制

发布时间：2022-08-10 16:55

　　目的:1.探讨miR-31对结肠炎的促进作用是否通过靶向SATB2。2.使用miR-31过表达的转基因小鼠,探讨miR-31促进结肠炎的分子机制。方法:1.SATB2敲低实验:将人结肠上皮细胞HCT 116分为control组、miR-31过表达组（转染miR-31 mimic,使miR-31过表达）、miR-31敲低组（转染miR-31 inhibiror,抑制miR-31的表达）、si-SATB2组（转染SATB2 siRNA,抑制SATB2的表达）。使用脂质体瞬时转染后将细胞放入CO2孵箱中,孵育72h后收取细胞。qRT-PCR检测siRNA的转染效率和最佳转染浓度;Western Blot检测4组细胞SATB2、NF-κB、COX-2、TGF-β1蛋白的表达。2.SATB2过表达实验:将人结肠上皮细胞HCT 116分为control组、pEXP-RB-Mam组（转染空载体）、pEXP-RB-Mam-SATB2组（转染SATB2过表达质粒）,待细胞贴壁后使用lip2000进行转染,转染后将细胞放入CO₂孵箱中孵育,6h后进行换液,72h后收集细胞。Weste... 

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【学位级别】：硕士

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前言
第一部分 SATB2对miR-31 促进结肠炎的影响
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 实验分组
        1.3 实验方法
        1.4 统计学分析
    2 结果
        2.1 SATB2 siRNA的转染效率以及最佳转染浓度
        2.2 Western Blot检测HCT116 细胞中SATB2 蛋白的表达
        2.3 Western Blot检测HCT116 细胞中炎症相关蛋白的表达
        2.4 Western Blot检测SATB2 过表达质粒的转染效率
        2.5 SATB2 过表达对HCT116 细胞炎症相关蛋白表达的影响
    3 讨论
    4 结论
第二部分 miR-31 通过调节TLR4/NF-κB信号通路促进肠炎发生
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 实验分组
        1.3 实验方法
        1.4 统计学分析
    2 结果
        2.1 Western Blot检测小鼠结肠组织SATB2 蛋白的表达
        2.2 IHC检测小鼠结肠组织SATB2 蛋白的表达
        2.3 Western Blot检测小鼠结肠组织TLR4、NF-ΚB蛋白的表达
        2.4 IHC检测小鼠结肠组织TLR4、NF-κB蛋白的表达
        2.5 小鼠结肠组织中COX-2、TNF-α、iNOS蛋白的表达
    3 讨论
    4 结论
第三部分 miR-31 对溃疡性结肠炎小鼠结肠上皮细胞凋亡的影响
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 实验分组
        1.3 实验方法
        1.4 统计学分析
    2 结果
        2.1 小鼠结肠组织细胞的凋亡指数
        2.2 Western Blot检测小鼠结肠组织中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2 的表达
        2.3 IHC检测小鼠结肠组织中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2 的表达
    3 讨论
    4 结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
个人简介



本文编号：3674007