热休克蛋白70羧基末端相关蛋白（CHIP）参与高糖介导下的血管内皮细胞损伤

发布时间：2022-11-06 09:52

　　背景:随着世界人口老龄化,糖尿病患病人数逐年增加,根据2019年国际糖尿病联盟数据显示,全球20到79岁糖尿病患者已达4.63亿,平均每11人中1人患有糖尿病,预计2045年将突破7亿^[1]。长期体内高血糖状态将导致周围血管组织病变,最终导致脏器的衰竭,如糖尿病肾病、糖尿病心脏病和糖尿病眼病等。而在糖尿病患者的死亡人数当中,1/2患者死于心血管并发症^[2]。糖尿病心血管疾病主要包括糖尿病心肌病和糖尿病动脉粥样硬化。虽然长期高血糖导致心血管疾病发病机制尚未完全阐明,但大量研究证实心血管细胞内炎症反应、氧化应激和细胞凋亡在糖尿病心血管疾病发病机制中占有重要地位,研究显示,糖尿病患者心血管组织内MAPK和NF-κB大量激活,而降低MAPK和NF-κB能改善炎症反应和细胞凋亡并降低心血管细胞损伤进而改善心脏和血管功能^[3-4]。热休克蛋白70羧基末端反应蛋白（The carboxyl terminus of heat shock protein70 interacting protein:CHIP）是E3泛素连接酶的一个成员,首... 

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
中英文缩略词表
第1章 引言
    1.1 概要
第2章 细胞实验
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验细胞
        2.1.2 主要试剂与耗材
        2.1.3 主要仪器
    2.2 原代脐静脉血管内皮细胞的提取、冻存与复苏
        2.2.1 主要试剂的制备
        2.2.2 提取原代脐静脉血管内皮细胞
        2.2.3 原代脐静脉内皮细胞的冻存
        2.2.4 原代脐静脉内皮细胞的复苏
    2.3 实验分组
        2.3.1 实验前阶段
        2.3.2 实验阶段
    2.4 病毒转染
    2.5 MTT检测细胞存活率
        2.5.1 MTT溶液的配制
        2.5.2 实验步骤
    2.6 Tunel法检测细胞凋亡率
        2.6.1 按照下表配制Tunel检测液,备用。
        2.6.2 实验步骤
        2.6.3 实验注意事项
    2.7 ELISA检测ET-1 含量
        2.7.1 标准品梯度配置表
        2.7.2 实验步骤
        2.7.3 实验注意事项
    2.8 NO检测
        2.8.1 试剂的准备
        2.8.2 实验步骤
        2.8.3 实验注意事项
    2.9 SOD检测
        2.9.1 试剂的准备
        2.9.2 细胞总SOD的提取
        2.9.3 实验步骤
        2.9.4 实验注意事项
    2.10 氧自由基检测
        2.10.1 试剂的准备
        2.10.2 实验步骤
        2.10.3 实验注意事项
    2.11 qRT-PCR检测炎症因子mRNA表达
        2.11.1 总RNA提取
        2.11.2 总RNA纯度检测
        2.11.3 逆转录合成c DNA
        2.11.4 实时荧光定量PCR
        2.11.5 实验注意事项
    2.12 Western blot
        2.12.1 试剂的准备
        2.12.2 总蛋白质提取
        2.12.3 BCA检测蛋白质浓度
        2.12.4 蛋白印迹过程
        2.12.5 实验注意事项
    2.13 统计学分析
第3章 结果
    3.1 慢病毒转染脐静脉血管内皮细胞结果
    3.2 下调CHIP表达加重高糖介导的脐静脉血管内皮细胞死亡率
    3.3 下调CHIP表达加重高糖介导的脐静脉血管内皮细胞凋亡率
    3.4 下调CHIP表达加重高糖培养的脐静脉血管内皮细胞ET-1分泌并下调NO含量
    3.5 下调CHIP表达加重高糖培养的脐静脉血管内皮细胞氧化应激水平
    3.6 下调CHIP表达加重高糖培养的脐静脉血管内皮细胞炎症因子表达
    3.7 下调CHIP表达促进高糖培养的脐静脉血管内皮细胞MAPK和 NF-κB磷酸化
第4章 讨论
第5章 结论
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]p38 MAPK信号转导通路及其与细胞凋亡的关系[J]. 夏洪平,杨惠玲.  癌变.畸变.突变. 2006(03)
[2]高血糖加速动脉粥样硬化的分子生物学机制[J]. 李震花,张涛,葛志明.  中国动脉硬化杂志. 2006(07)
[3]p38 MAPK通路在TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞分泌ET-1与eNOS中的作用及通心络干预影响[J]. 袁国强,王玲玲,杨海涛,吴士珍,贾振华,李娟,吴以岭.  中国药理学通报. 2009(11)
[4]细胞凋亡分子机制研究进展[J]. 王延卓,马锦屏.  畜牧与饲料科学. 2013(04)
[5]阿托伐他汀通过抑制PKC的激活对抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激反应[J]. 柴大军,宁若冰,祝江,许昌声,谢泓,林金秀.  中国病理生理杂志. 2012(09)
[6]肺内皮功能障碍与肺动脉高压病变研究进展[J]. 曹绍华,王云,井雷,赵兵,赵晓民.  中国老年学杂志. 2012(02)
[7]高血糖对血管内皮细胞损伤机制的影响[J]. 廖凯斌,李潮生.  医学综述. 2019(11)
[8]Bcl-2与细胞凋亡[J]. 李莉.  国外医学(临床生物化学与检验学分册). 1999(06)
[9]吸入一氧化氮对兔的肺功能和血小板凝聚功能的影响[J]. 谢桂芬,高枫,孙波 ,吴玥 ,邵肖梅,樊绍曾,罗伯特·林德瓦尔.  上海医学. 1999(04)
[10]血管内皮细胞中NF-κB和p38MAPK的激活[J]. 游婷婷,陈刚.  国际泌尿系统杂志. 2007 (04)

博士论文
[1]CHIP在骨发生及肝癌中的作用[D]. 李珊.清华大学 2014

硕士论文
[1]H2S通过抑制p38 MAPK/坏死性凋亡通路保护人脐静脉内皮细胞对抗高血糖引起的损伤及炎症[D]. 林佳琼.南方医科大学 2017
[2]JAK-STAT/NF-κB通路介导高糖引起的人脐静脉内皮细胞的损伤与炎症反应[D]. 廖静秋.南方医科大学 2016



本文编号：3703289