CalR调控副溶血弧菌Ⅵ型分泌系统的分子机制研究

发布时间：2022-11-12 15:25

　　目的:本研究选取副溶血弧菌T6SS1（VP1386-1414）上若干操纵子（VP1388-1390,VP1393-1399,VP1400-1405及VP1409-1406）的首基因和T6SS2（VPA1024-1046）上各操纵子（VPA1027-1024,VPA1043-1028及VPA1044-1046）的首基因为研究对象,利用表型实验和分子生物学实验研究Lys R型转录调节因子CalR对T6SSs的转录调控机制,为我们进一步理解副溶血弧菌的致病机制提供一定的理论基础。方法:1.抑菌实验:选取本课题组前期构建的副溶血弧菌野生株、缺陷株及回补株菌体（WT-p BAD33,Δcal R-p BAD33及C-Δcal R）。将等量WT-p BAD33,Δcal R-p BAD33及C-Δcal R分别与大肠杆菌S17-p BAD33按特定比例混和后,置37°C下静置共孵育4 h,用不同浓度的抗生素筛选,以0 h的菌落计数为参照,观察各菌株4 h后的菌量变化,从而分析CalR是否调控副溶血弧菌的抑菌能力。2.细胞粘附实验:取等量WT-p BAD33,Δcal R-p BAD33及C-Δca... 

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
英文缩写索引
1 引言
    1.1 副溶血弧菌的生物学特性及其危害
    1.2 副溶血弧菌主要毒力因子
        1.2.1 溶血素
        1.2.2 Ⅲ型分泌系统
        1.2.3 Ⅵ型分泌系统
        1.2.4 粘附因子
    1.3 转录调控因子CalR的研究进展
        1.3.1 CalR在其他菌中的同源蛋白研究现状
        1.3.2 副溶血弧菌中CalR的研究概况
    1.4 研究目的、内容及路线设计
        1.4.1 研究目的：
        1.4.2 研究内容：
        1.4.3 总设计路线：
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株和质粒
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 主要溶液
        2.1.5 本文所用引物
    2.2 方法
        2.2.1 副溶血弧菌对大肠杆菌的抑菌表型实验
        2.2.2 副溶血弧菌对Hela细胞的粘附表型实验
        2.2.3 LacZ报告基因融合实验
        2.2.4 引物延伸（Primer Extension）及实时定量RT-PCR（qRT-PCR）
        2.2.5 凝胶阻滞实验（Electrophoretic mobility shift assay，EMSA）
        2.2.6 竞争性凝胶阻滞实验
3 结果与讨论
    3.1 副溶血弧菌CalR直接激活T6SS1的表达
        3.1.1 抑菌表型实验
        3.1.2 CalR能激活T6SS1的启动子活性
        3.1.3 CalR能直接和T6SS1的基因相互作用
        3.1.4 讨论
    3.2 副溶血弧菌CalR直接激活T6SS2的表达
        3.2.1 副溶血弧菌对Hela细胞的粘附表型实验
        3.2.2 CalR能激活T6SS2的转录
        3.2.3 CalR能激活T6SS2的基因的启动子区域
        3.2.4 CalR能直接激活T6SS2的表达
        3.2.5 CalR竞争性拮抗H-NS与靶基因的相互结合
        3.2.6 讨论
4 主要结论及展望
    4.1 主要结论
    4.2 展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表论文及学术交流


【参考文献】：
期刊论文
[1]副溶血弧菌calR的基因敲除株与回补株构建[J]. 侯书宁,孟彦言,朱文君,张凌宇,周冬生,张义全,黄新祥.  军事医学. 2016(05)
[2]H-NS蛋白对副溶血弧菌hcp1的转录调控[J]. 王洁,董新波,高丽晓,周冬生,殷喆,张义全.  微生物学报. 2016(01)
[3]耶尔森菌Ⅲ型分泌系统研究进展[J]. 阳芬,杨秋林,杜宗敏.  生物技术通讯. 2013(03)
[4]副溶血弧菌耐热性直接溶血素的研究进展[J]. 李巧苹,刘晓红,蒋德源.  福建畜牧兽医. 2010(06)
[5]副溶血弧菌毒力因子及其致病机理研究进展[J]. 杨振泉,焦新安.  中国人兽共患病学报. 2008(11)
[6]副溶血性弧菌食物中毒菌株的血清型、耐药性及基因检测[J]. 程苏云,翁景清,林香娟,任锦玉.  中国卫生检验杂志. 2002(02)
[7]1994～2000年579株副溶血性弧菌肠道感染检测回顾[J]. 王红旗,夏光明,李景云,宋敏,崔恩博,鲍春梅.  肝脏. 2001(S1)



本文编号：3706615