马齿苋黄酮类化合物分离纯化及抗糖尿病活性研究

发布时间：2017-05-16 15:11

  本文关键词：马齿苋黄酮类化合物分离纯化及抗糖尿病活性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：据统计,全世界糖尿病人数每年都呈高速增长的趋势,2030年全世界将会有5.5亿糖尿病病人。现有的众多种类的治疗糖尿病的西药能有效地降低高血糖,但其存在较多的毒副作用。因此,寻找新的高效低毒的抗糖尿病物质,已经成为解决问题的突破点和重心。马齿苋黄酮(Portulaca oleracea L.flavonoids, POF)是植物马齿苋的一种主要活性成分,对其分离提取、含量测定和结构分析已有较多研究,其抗氧化、消炎、抗糖尿病等作用也有少量研究报道。本研究对马齿苋黄酮的分离提取工艺进行了优化,并从细胞分子水平和整体动物水平研究马齿苋黄酮的降糖功能及其分子作用机制。1、超声波提取马齿苋黄酮响应曲面优化结果：乙醇溶液浓度39%,料液比24：1(v：m),超声温度55℃,超声时间为15 min,黄酮的平均提取率为16.25 mg/g。2、从马齿苋黄酮类化合物中分离得到槲皮素。3、马齿苋黄酮类化合物对·OH、DPPH和O2-三种自由基有明显的清除作用,展现了较强的抗氧化效果。4、马齿苋黄酮及槲皮素(0.5 mg/mL,24 h)可明显抑制高糖高脂诱导的胰岛β细胞(HIT-T15)的细胞毒性,促进细胞对葡萄糖的吸收利用。其作用机制可能与马齿苋黄酮类化合物或槲皮素调节细胞内IR、IRS-2、PKB/Akt和GLUT-2基因与蛋白质表达有关。5、马齿苋黄酮类化合物可明显降低高糖高脂饲料和注射STZ诱导Ⅱ型糖尿病模型大鼠的高血糖和高血脂,改善胰岛素抵抗。其作用机制与马齿苋黄酮类化合物的抗氧化活性和调节大鼠胰脏IR、IRS-1、PKB/Akt的基因表达有关。本研究从马齿苋黄酮类化合物的提取工艺优化、降糖功能、抗氧化和抗糖尿病作用的分子机理等方面进行了较为系统的研究。为进一步从天然产物中开发具有降糖作用的功能食品或药物前体化合物提供了理论依据。
【关键词】：马齿苋黄酮 Ⅱ型糖尿病 胰岛素抵抗 降血糖作用 分子机制
【学位授予单位】：江西科技师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R284.2;R285.5
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-11
• 第1章 绪论11-18
• 1.1 糖尿病的简介11
• 1.2 马齿苋的概述11-12
• 1.3 黄酮类化合物的研究进展12-15
• 1.3.1 黄酮类化合物分类和性质12
• 1.3.2 黄酮类化合物构效关系12-15
• 1.4 本课题的研究意义及主要内容15-18
• 1.4.1 研究意义15-16
• 1.4.2 主要内容16-18
• 第2章 马齿苋黄酮超声波提取工艺优化及体外试验18-32
• 2.1 引言18
• 2.2 试验材料及仪器18-19
• 2.2.1 试验材料18-19
• 2.2.2 试验仪器19
• 2.3 试验方法19-22
• 2.3.1 芦丁标准曲线的绘制19
• 2.3.2 马齿苋黄酮类化合物的含量测定方法19
• 2.3.3 马齿苋黄酮类化合物超声波提取单因素试验19-20
• 2.3.4 马齿苋黄酮类化合物超声波提取相应面试验20
• 2.3.5 马齿苋黄酮清除DPPH自由基能力试验20-21
• 2.3.6 马齿苋黄酮清除羟基自由基(·OH)能力试验21
• 2.3.7 马齿苋黄酮清除超氧阴离子(O~(2-))自由基能力试验21-22
• 2.3.8 统计分析22
• 2.4 结果与讨论22-30
• 2.4.1 乙醇体积分数对马齿苋黄酮提取率的影响23
• 2.4.2 料液比对马齿苋黄酮提取率的影响23-24
• 2.4.3 超声温度对马齿苋黄酮提取率的影响24-25
• 2.4.4 超声时间对马齿苋黄酮提取率的影响25
• 2.4.5 响应面对马齿苋黄酮类化合物提取率的影响25-28
• 2.4.6 马齿苋黄酮DPPH自由基清除率的测定结果28-29
• 2.4.7 马齿苋黄酮羟基自由基(·OH)清除率的测定结果29
• 2.4.8 马齿苋黄酮超氧阴离子自由基(O~(2-))清除率的测定结果29-30
• 2.5 本章小结30-32
• 第3章 马齿苋黄酮的分离纯化及单体鉴定32-39
• 3.1 引言32
• 3.2 试验材料及仪器32-33
• 3.2.1 试验材料32
• 3.2.2 试验仪器32-33
• 3.3 试验方法33-35
• 3.3.1 样品处理33
• 3.3.2 聚酰胺粉的预处理及再生33-34
• 3.3.3 马齿苋黄酮类化合物分离纯化研究34-35
• 3.4 结果与讨论35-37
• 3.4.1 马齿苋纯化黄酮的高效液相色谱检测结果35-37
• 3.4.2 马齿苋纯化黄酮的薄层色谱检测结果37
• 3.5 本章小结37-39
• 第4章 马齿苋黄酮及槲皮素改善胰岛细胞胰岛素抵抗的机制研究39-65
• 4.1 引言39
• 4.2 材料及仪器39-43
• 4.2.1 试验材料40-41
• 4.2.2 试验仪器41
• 4.2.3 相关试剂的配制41-43
• 4.3 试验方法43-52
• 4.3.1 药物的制备43
• 4.3.2 HIT-T15细胞的培养43-45
• 4.3.3 马齿苋黄酮及槲皮素对HIT-T15细胞相对增殖率影响45
• 4.3.4 HIT-T15细胞胰岛素抵抗模型建立45
• 4.3.5 葡萄糖氧化酶法鉴定胰岛素抵抗模型45-46
• 4.3.6 蛋白印记法(Western blotting)46-49
• 4.3.7 逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)49-51
• 4.3.8 统计分析51-52
• 4.4 结果与讨论52-63
• 4.4.1 MTT比色法52-53
• 4.4.2 形态学观察53-54
• 4.4.3 葡萄糖吸收结果分析54-55
• 4.4.4 蛋白标准曲线55-56
• 4.4.5 Western blot检测HIT-T15细胞胰岛素抵抗信号转导通路相关基因的蛋白水平表达56-61
• 4.4.6 RT-PCR检测HIT-T15细胞胰岛素抵抗信号转导通路相关基因转录水平表达的影响61-63
• 4.5 本章小结63-65
• 第5章 马齿苋黄酮对Ⅱ型糖尿病大鼠的作用机制探讨65-75
• 5.1 引言65-66
• 5.2 试验材料及仪器66-67
• 5.2.1 试验材料66
• 5.2.2 试验仪器66-67
• 5.3 试验方法67-70
• 5.3.1 试验溶液的配制67-68
• 5.3.2 马齿苋黄酮类化合物对Ⅱ型糖尿病大鼠糖脂代谢的影响68-69
• 5.3.3 RT-PCR69
• 5.3.4 统计分析69-70
• 5.4 结果与讨论70-74
• 5.4.1 POF对Ⅱ型糖尿病大鼠FBG的影响70
• 5.4.2 POF对Ⅱ型糖尿病大鼠血脂的影响70-71
• 5.4.3 POF对Ⅱ型糖尿病大鼠的抗氧化活性的影响71-72
• 5.4.4 RT-PCR检测大鼠胰脏胰岛素抵抗信号转导通路相关基因转录水平表达的影响72-74
• 5.5 本章小结74-75
• 第6章 结论与展望75-77
• 6.1 结论75
• 6.2 展望75-77
• 参考文献77-84
• 攻读学位期间的研究成果及所获荣誉84-85
• 致谢85-86
• 附录 缩写词对照表86

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本文编号：371176