桑叶多糖SY01-23对人肠道菌群的活性筛选及其主要糖残基半乳糖醛酸对胰岛β细胞的毒性探究

发布时间：2022-12-07 22:43

　　桑叶（Morus alba L.）多糖在抗糖尿病、抗氧化、抗炎等方面都具有丰富的生物学活性,因此对桑叶多糖的研究越来越受关注,但该多糖是否通过调节肠道菌群发挥相应的生物学活性的研究却未见报道。因此,我们探究了从桑叶中提取的均一多糖SY01-21、SY01-22以及SY01-23对肠道菌群的影响。我们发现,SY01-21只能促进解纤维拟杆菌（Bacteroides cellulosilyticus,BC）的增殖,SY01-22只能促进卵形拟杆菌（Bacteroides ovatus,BO）的增殖,而SY01-23对BO以及BC两种菌的增殖均有促进作用。基于上述结果,我们选取了SY01-23进行进一步的探究。我们首先发现,SY01-23对鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus GG,LGG）、罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri,LR）以及长双歧杆菌（Bifidibacteria longum,BL）均无明显活性。其次,BO及BC可以将SY01-23降解成为单糖以及寡糖片段,并生成对人体有益的短链脂肪酸乙酸和丙酸。此外,研究发现BO与多形拟杆菌（B... 

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【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 桑叶的活性成分及生物活性
        1.1.1 桑叶的活性成分
        1.1.2 桑叶多糖的生物活性
    1.2 肠道菌群
        1.2.1 肠道菌群的概述
        1.2.2 拟杆菌可代谢复杂的植物多糖
        1.2.3 肠道菌群之间的互利共生
        1.2.4 短链脂肪酸
    1.3 葡萄糖毒性
        1.3.1 葡萄糖毒性损害机体健康
        1.3.2 β细胞葡萄糖毒性的机理探究
        1.3.3 常见单糖研究概述
        1.3.4 科学问题及研究意义
第2章 桑叶多糖SY01-23 对人肠道菌群的活性筛选
    2.1 实验材料及试验方法
        2.1.1 桑叶及菌株来源
        2.1.2 实验试剂、仪器及耗材
        2.1.3 多糖的提取、分离与纯化
        2.1.4 桑叶多糖分子量测定
        2.1.5 单糖组成分析
        2.1.6 拟杆菌生长曲线测定
        2.1.7 益生菌生长曲线测定
        2.1.8 高效凝胶渗透色谱(HPGPC)检测拟杆菌降解多糖产物
        2.1.9 薄层色谱分析(TLC)检测拟杆菌降解多糖产物
        2.1.10 高效阴离子交换色谱-脉冲安培(HPAEC-PAD)检测拟杆菌降解多糖产物
        2.1.11 短链脂肪酸的测定
    2.2 实验结果与讨论
        2.2.1 桑叶多糖的分子量测定
        2.2.2 桑叶多糖的糖组成分析
        2.2.3 SY01-23 对拟杆菌的增殖有良好的促进作用
        2.2.4 SY01-23 对三种益生菌的增殖无促进作用
        2.2.5 拟杆菌降解SY01-23 机制初步探究
        2.2.6 SY01-23 促进拟杆菌的互利共生
        2.2.7 拟杆菌可通过利用SY01-23 产生短链脂肪酸
    2.3 总结
第3章 半乳糖醛酸对胰岛β细胞毒性机理初步探究
    3.1 实验材料及实验方法
        3.1.1 细胞及动物来源
        3.1.2 实验试剂、仪器及耗材
        3.1.3 细胞培养
        3.1.4 MTT实验
        3.1.5 流式Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡
        3.1.6 Western blot
        3.1.7 实时荧光定量PCR(Real-time PCR)
        3.1.8 Hoechst染色
        3.1.9 活性氧检测
        3.1.10 小鼠血糖测试
    3.2 实验结果与讨论
        3.2.1 单糖毒性的筛选
        3.2.2 半乳糖醛酸诱导INS-1E细胞凋亡
        3.2.3 半乳糖醛酸诱导INS-1E产生氧化应激反应并影响相关蛋白的表达
        3.2.4 半乳糖醛酸诱导INS-1E细胞GSIS信号通路相关基因下调
        3.2.5 半乳糖醛酸减少小鼠体重增加并诱导小鼠血糖升高
    3.3 总结
第4章 总结
    4.1 已解决的科学问题
        4.1.1 桑叶多糖SY01-23 调节拟杆菌的组成和代谢
        4.1.2 半乳糖醛酸对胰岛β细胞毒性作用机理研究
    4.2 尚待解决的科学问题
        4.2.1 SY01-23 的结构解析以及拟杆菌降解SY01-23 多糖的具体机制
        4.2.2 SY01-23 促进肠道菌群互利共生的具体机制
        4.2.3 半乳糖醛酸在小鼠体内对胰岛β细胞的损伤机制
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]桑叶多糖调节小鼠肠道菌群失调的研究[J]. 陈涟昊,张霞,孙世芳,王菱枝,车有,赵骏,宋存江.  现代药物与临床. 2015(06)
[2]桑叶多糖MLPⅡ的基本结构及对糖尿病模型大鼠的降血糖作用[J]. 路国兵,任春久,崔为正,王彦文,高绘菊,牟志美.  蚕业科学. 2011(06)



本文编号：3713002