RNF20调控肝癌细胞恶性表型及其DNA损伤修复的研究

发布时间：2022-12-10 04:03

　　目的:探讨RNF20缺陷对肝细胞肝癌的细胞增殖、侵袭、迁移和DNA损伤修复的影响及其相关的作用机制。方法:1.稳定低表达RNF20的SMMC-7721及Huh7肝癌细胞系的建立（1）针对RNF20基因设计3组短发夹RNA序列（RNF20-sh RNA1、RNF20-sh RNA2和RNF20-sh RNA3）;（2）构建p Lent-U6-GFP-Puro-sh RNF20、p Lent-U6-GFP-Puro-sh Ctrl慢病毒载体;（3）包装慢病毒,感染人肝癌细胞SMMC-7721和Huh7,荧光显微镜观察其绿色荧光蛋白表达,经嘌呤霉素抗性筛选建立RNF20敲低的肝细胞肝癌稳转细胞系。（4）采用实时荧光定量PCR技术、免疫荧光染色法和免疫印迹法分别鉴定细胞中RNF20 m RNA以及RNF20蛋白的表达。2.RNF20缺陷对肝癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响及其机制（1）采用CCK-8、Brd U掺入实验、平板克隆实验、Transwell侵袭实验、划痕实验检测RNF20缺陷对肝癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响;（2）采用免疫印迹法检测RNF20缺陷对T-Akt及p-Akt蛋白的影响;（3... 

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【学位级别】：硕士

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前言
第一部分 稳定低表达RNF20的SMMC-7721及Huh7 肝癌细胞系的建立
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果
        2.1 SMMC-7721和Huh7 细胞中RNF20 mRNA表达情况
        2.2 RNF20 敲低效率的鉴定
    3 讨论
    4 结论
第二部分 RNF20 缺陷对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果
        2.1 RNF20 缺陷对肝癌细胞增殖的影响
        2.2 RNF20 缺陷对肝癌细胞迁移及侵袭的影响
        2.3 RNF20 在肝癌细胞增殖和迁移中的作用机制
    3 讨论
    4 结论
第三部分 RNF20 缺陷对肝癌细胞DNA损伤修复的影响
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果
        2.1 RNF20 缺陷对H2Bub1 的影响
        2.2 RNF20 缺陷对肝癌细胞DNA双链断裂修复的影响
        2.3 RNF20 缺陷对肝癌细胞同源重组修复的影响
    3 讨论
    4 结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
个人简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]Biomarkers for the early diagnosis of hepatocellular carcinoma[J]. Nobuhiro Tsuchiya,Yu Sawada,Itaru Endo,Keigo Saito,Yasushi Uemura,Tetsuya Nakatsura.  World Journal of Gastroenterology. 2015(37)
[2]Decreased histone H2B monoubiquitination in malignant gastric carcinoma[J]. Zi-Jing Wang,Jing-Lin Yang,Yi-Ping Wang,Jiang-Yan Lou,Jie Chen,Cong Liu,Lian-Di Guo.  World Journal of Gastroenterology. 2013(44)



本文编号：3716018