黄芩苷上调FUT4表达及促进胚胎着床机制的研究

发布时间：2017-05-16 23:09

  本文关键词：黄芩苷上调FUT4表达及促进胚胎着床机制的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景与目的:1.糖基化在决定子宫内膜对胚胎的容受能力方面发挥重要作用。2.岩藻糖基转移酶Ⅳ(FUT4)在哺乳动物子宫内膜呈阶段特异性表达,并被认为是子宫内膜容受性标志物。3.黄芩苷(Baicalin)是从中药黄芩(Scutellaria Baicalensis)中提取的一种黄酮类单体,具有改善哺乳动物生殖的功能。4.然而,黄芩苷在胚胎与子宫内膜黏附过程中的调节作用是否与子宫内膜FUT4表达有关目前尚不清楚。5.本研究旨在探讨黄芩苷对胚胎黏附和着床的影响及其糖生物学作用机制,进一步揭示黄芩苷对哺乳动物胚胎着床的重要调控作用。方法:1.利用RT-PCR,Western blot和免疫荧光技术检测黄芩苷对人子宫内膜RL95-2细胞FUT4 mRNA和蛋白表达影响。2.采用Western blot技术检测正常对照(control)、二甲基亚砜(DMSO)、黄芩苷(baicalin)、Dickkopf 1(DKK1)、黄芩苷联合DKK1、转染对照(vector)、β-连环蛋白干扰(si-β-catenin)、黄芩苷联合si-β-catenin等8组Wnt/β-catenin信号通路关键分子磷酸化糖原合成激酶3β(p-GSK3β),GSK3β,β-catenin和特异蛋白5(sp5)表达水平。3.为探究sp5如何调节fut4表达,我们应用rt-pcr和westernblot技术检测sh-sp5,sp1-cdna及其共转染对rl95-2细胞fut4mrna和蛋白表达影响。4.利用子宫内膜rl95-2细胞和胚胎jar细胞共培养建立的体外植入模型,检测了包括正常对照、dmso、baicalin(3,6μg/ml)、sh-sp5等15组的胚胎黏附率。5.采用rt-pcr,westernblot和免疫组化技术进一步检测经黄芩苷和黄芩水煎液灌胃处理的昆明小鼠在孕第4天子宫内膜sp5和fut4mrna和蛋白表达情况。6.孕第8天计算正常对照、生理盐水、黄芩苷和黄芩水煎液组的小鼠胚胎着床数。结果:1.黄芩苷促进人子宫内膜细胞fut4mrna和蛋白表达。rt-pcr和westernblot结果显示,黄芩苷3μg/ml(p0.05)和6μg/ml(p0.01)能显著提高rl95-2细胞fut4mrna和蛋白表达水平;免疫荧光技术检测结果与rt-pcr和westernblot一致。2.黄芩苷活化人子宫内膜细胞wnt/β-catenin/sp5信号通路。westernblot结果显示,与正常对照组相比,黄芩苷(6μg/ml)能显著提高rl95-2细胞p-gsk3β,β-catenin和sp5(p0.001)的表达水平;同时,黄芩苷能够恢复dkk1和β-cateninsirna预处理的rl95-2细胞p-gsk3β,β-catenin和sp5的表达水平。3.sp5上调人子宫内膜细胞fut4mrna和蛋白表达水平。rt-pcr和westernblot结果显示,与对照组相比,sh-sp5(p0.001)、sp1-cdna(p0.01)和共转染(p0.001)组fut4mrna和蛋白表达水平显著降低。4.黄芩苷通过wnt/β-catenin/sp5信号通路上调fut4表达,促进子宫内膜细胞与胚胎细胞的黏附。黏附实验结果显示,正常对照、dmso、sh-control和mock组之间的胚胎黏附率无显著性差异;与对照组和dmso组相比,黄芩苷能显著提高rl95-2细胞的胚胎黏附率;与转染对照组相比,sh-sp5或sp1-cdna(p0.001)能显著降低rl95-2细胞的胚胎黏附率;同时,黄芩苷能够恢复sh-sp5或sp1-cdna预处理的rl95-2细胞的胚胎黏附率,但仍低于黄芩苷组;黄芩苷显著增加共转染组胚胎黏附率;进一步研究表明,黄芩苷能够显著反转FUT4 siRNA导致的低胚胎黏附率。5.黄芩苷促进着床窗口期小鼠子宫内膜SP5及FUT4 mRNA和蛋白表达。RT-PCR和Western blot揭示,与正常对照和生理盐水组比较,黄芩苷和黄芩水煎液能显著增加孕第4天小鼠子宫内膜FUT4和SP5 mRNA及蛋白表达水平;同时,免疫组化结果显示,黄芩水煎液组与正常对照组相比免疫染色较强,与黄芩苷组相比免疫染色较弱。6.黄芩苷提高小鼠妊娠成功率。与正常对照和生理盐水组比较,黄芩苷(P0.01)和黄芩水煎液(P0.05)组胚胎着床率显著增加。结论:1.黄芩苷上调人子宫内膜细胞及小鼠子宫内膜组织中FUT4 mRNA和蛋白表达水平。2.黄芩苷改善人子宫内膜RL95-2细胞与人胚胎JAR细胞之间的黏附。3.黄芩苷促进小鼠胚胎植入。4.黄芩苷通过Wnt/β-catenin信号通路上调子宫内膜FUT4表达,具有提高子宫内膜容受性的作用。
【关键词】：黄芩苷 胚胎 子宫内膜上皮细胞 FUT4 植入 β-catenin
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285
【目录】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-16
• 材料和方法16-33
• 结果33-40
• 讨论40-43
• 结论43-44
• 参考文献44-48
• 文献综述48-58
• 参考文献55-58
• 攻读学位期间发表文章情况58-59
• 致谢59-60

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本文编号：372096