蛋白质精氨酸甲基转移酶1通过TGF-β/Smad通路促进肝癌细胞上皮间质转化

发布时间：2023-04-07 00:36

　　研究目的:分析蛋白质精氨酸甲基化转移酶1(protein arginine methyltransferase 1,PRMT1)在肝正常组织及肝癌组织中表达量的差别。检测PRMT1在三种肝癌细胞系(HepG2、Bel-7402及SMMC-7721)的基础表达量。探讨PRMT1对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭等生物学行为的影响,并研究PRMT1在肝癌细胞上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)中作用,进一步探究其作用的分子机制。研究方法:在生物信息数据库中分析肝正常组织及肝癌组织中PRMT1的mRNA及蛋白质水平的表达,进一步分析PRMT1表达量与肝癌患者生存期的关系。用Western Blot、定量PCR分别检测HepG2、Bel-7402及SMMC-7721三种肝癌细胞中PRMT1蛋白质及mRNA的基础表达水平;用干扰质粒sh-PRMT1进行慢病毒包装,收集病毒感染PRMT1表达量相对较高的肝癌细胞,筛选稳转细胞株;构建PRMT1过表达Flag-PRMT1质粒并转染至PRMT1表达量相对较低的肝癌细胞中,用G418筛选稳定表达株,并用Wes...

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
主要缩略词表
第一章 绪论
    1.1 研究背景
        1.1.1 肝癌
        1.1.2 蛋白质精氨酸甲基转移酶 1
        1.1.3 上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition, EMT）
        1.1.4 TGF-β/Smad信号通路
    1.2 研究目的、内容与技术路线
        1.2.1 研究目的
        1.2.2 研究内容
        1.2.3 研究技术路线图
第二章 应用数据库分析PRMT1在肝癌组织中的表达
    2.1 所用数据库
    2.2 分析过程
        2.2.1 分析PRMT1在肝癌组织中mRNA水平的表达
        2.2.2 分析PRMT1在肝癌组织中蛋白质表达量
        2.2.3 分析PRMT1表达量与肝癌患者生存期的关系
    2.3 结果
        2.3.1 肝癌组织中PRMT1的mRNA水平呈高表达
        2.3.2 肝癌组织中PRMT1的蛋白质水平呈高表达
        2.3.3 PRMT1的表达量与肝癌患者生存期相关
    2.4 讨论
第三章 构建质粒并筛选稳转细胞株
    3.1 实验仪器和材料
        3.1.1 肝癌细胞和质粒
        3.1.2 实验仪器
        3.1.3 实验耗材
        3.1.4 实验试剂
        3.1.5 试剂配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞培养
        3.2.2 DH-5α/ Stbl3感受态细胞制备
        3.2.3 过表达质粒Flag-PRMT1构建
        3.2.4 过表达稳转细胞筛选
        3.2.5 病毒包装
        3.2.6 干扰稳转细胞筛选
        3.2.7 RNA提取
        3.2.8 定量PCR
        3.2.9 Western Blot
    3.3 数据处理与统计方法
    3.4 结果
        3.4.1 PRMT1在不同肝癌细胞系中表达的差异
        3.4.2 PCR扩增PRMT1
        3.4.3 pCMV6-Entry质粒双酶切鉴定
        3.4.4 sh-PRMT1及Flag-PRMT1质粒测序
        3.4.5 验证质粒sh-PRMT1干扰效率
        3.4.6 验证质粒Flag-PRMT1过表达效果
    3.5 讨论
第四章 PRMT1对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响
    4.1 实验仪器和材料
        4.1.1 实验仪器
        4.1.2 实验耗材
        4.1.3 实验试剂
        4.1.4 试剂配制
        4.1.5 主要细胞及质粒
    4.2 实验方法
        4.2.1 细胞培养
        4.2.2 细胞计数
        4.2.3 CCK-8 实验
        4.2.4 平板克隆形成实验
        4.2.5 细胞划痕实验
        4.2.6 Transwell迁移实验
        4.2.7 Transwell侵袭实验
        4.2.8 Western Blot
    4.3 数据处理与统计方法
    4.4 结果
        4.4.1 PRMT1对肝癌细胞增殖能力的影响
        4.4.2 PRMT1对肝癌细胞克隆形成能力的影响
        4.4.3 PRMT1对肝癌细胞迁移能力的影响
        4.4.4 PRMT1对肝癌细胞侵袭能力的影响
        4.4.5 PRMT1对肝癌细胞侵袭相关蛋白表达MMP2及MMP9表达的影响
    4.5 讨论
第五章 PRMT1对肝癌细胞EMT的影响极其分子机制
    5.1 实验仪器和材料
        5.1.1 实验仪器
        5.1.2 实验耗材
        5.1.3 实验试剂
        5.1.4 试剂配制
    5.2 实验方法
        5.2.1 细胞培养、Western Blot
    5.3 数据处理与统计方法
    5.4 结果
        5.4.1 PRMT1对上皮间质转化相关蛋白的影响
        5.4.2 Western Blot检测PRMT1对TGF-β/Smad信号通路的影响
    5.5 讨论
结论与展望
    结论
    展望
参考文献
综述
    参考文献
攻读硕士期间发表论文
致谢



本文编号：3784730