共表达细胞因子IL-18或IL-21的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)的构建及其功能研究
发布时间:2023-04-17 05:21
嵌合抗原受体 T 细胞治疗(Chimeric antigen receptor T cell therapy,CAR-T therapy)是一种新兴的肿瘤免疫治疗,该疗法是通过对患者体内的T细胞进行改造,在T细胞膜上表达一种肿瘤特异性的嵌合抗原受体(Chimeric antigen receptors,CARs),使其能够通过肿瘤特异性的、非MHC分子依赖性的途径激活,从而发挥抗肿瘤作用。CAR是一种跨膜受体,主要由胞外识别结构域、跨膜区和胞内激活结构域组成,其胞外识别结构域通常为肿瘤细胞特征性表面分子的单链抗体(singlechain variable fragment,scFv),胞内激活结构域为T细胞受体(T cell receptor,TCR)的CD3zeta片段,当CAR胞外的单链抗体与肿瘤细胞识别、结合,即可激活CD3zeta,进而直接激活T细胞。至今已发展出三代CAR,其中第二代CAR是研究最多、最具应用前景的CAR,第二代CAR分子在跨膜区和激活结构域之间还偶联了一个T细胞共刺激分子,如CD28、4-1BB等,在共刺激分子的协同作用下,CAR-T细...
【文章页数】:96 页
【学位级别】:硕士
【文章目录】:
摘要
Abstract
第一章 前言
1 嵌合抗原受体T细胞
2 细胞因子IL-18和IL-21
3 慢病毒载体表达系统
4 本研究的目的和意义
第二章 共表达细胞因子IL-18或IL-21的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)的构建及其功能研究
引言
一、材料
1 细胞
2 菌株及质粒
3 主要试剂
4 实验器材
5 实验常用试剂配制
二、方法
1 人全长细胞因子IL-18和IL-21序列的体外克隆
2 共表达IL-18或IL-21的CAR分子的重组慢病毒表达载体的构建
3 慢病毒包装
4 JurCAR-T细胞制备
5 JurCAR-T细胞功能检测
6 细胞杀伤实验
7 人脐带血淋巴细胞CAR-T细胞制备
三、结果
1 αCD19scFv、4-1BB-CD3zeta的克隆及拼接
2 IL-18、IL-21、IRES序列的克隆及拼接
3 慢病毒V-CAR19、V-CAR19-IL-18、V-CAR19-IL-21的制备
4 JurCAR-T (JurCAR19、JurCAR19-IL-18、JurCAR19-IL-21)细胞的制备
5 JurCAR19-IL-18、JurCAR19-IL-21细胞IFN-γ表达情况检测
6 JurCAR19-IL-18、JurCAR19-IL-21细胞体外增殖能力检测
7 JurCARI9-IL-18、JurCAR19-IL-21细胞体外杀伤功能检测
8 JurCAR19-IL-18、JurCAR19-IL-21细胞活化水平检测
9 JurCAR19-IL-18、JurCAR19-IL-21细胞激活后体外增殖能力检测
10 CAR-T细胞制备
11 CAR19-IL18-T、CAR19-IL21-T细胞体外杀伤功能检测
12 CAR19-IL18-T、CAR19-IL21-T细胞活化水平检测
四、讨论
第三章 结论
附录
参考文献
致谢
本文编号:3792656
【文章页数】:96 页
【学位级别】:硕士
【文章目录】:
摘要
Abstract
第一章 前言
1 嵌合抗原受体T细胞
2 细胞因子IL-18和IL-21
3 慢病毒载体表达系统
4 本研究的目的和意义
第二章 共表达细胞因子IL-18或IL-21的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)的构建及其功能研究
引言
一、材料
1 细胞
2 菌株及质粒
3 主要试剂
4 实验器材
5 实验常用试剂配制
二、方法
1 人全长细胞因子IL-18和IL-21序列的体外克隆
2 共表达IL-18或IL-21的CAR分子的重组慢病毒表达载体的构建
3 慢病毒包装
4 JurCAR-T细胞制备
5 JurCAR-T细胞功能检测
6 细胞杀伤实验
7 人脐带血淋巴细胞CAR-T细胞制备
三、结果
1 αCD19scFv、4-1BB-CD3zeta的克隆及拼接
2 IL-18、IL-21、IRES序列的克隆及拼接
3 慢病毒V-CAR19、V-CAR19-IL-18、V-CAR19-IL-21的制备
4 JurCAR-T (JurCAR19、JurCAR19-IL-18、JurCAR19-IL-21)细胞的制备
5 JurCAR19-IL-18、JurCAR19-IL-21细胞IFN-γ表达情况检测
6 JurCAR19-IL-18、JurCAR19-IL-21细胞体外增殖能力检测
7 JurCARI9-IL-18、JurCAR19-IL-21细胞体外杀伤功能检测
8 JurCAR19-IL-18、JurCAR19-IL-21细胞活化水平检测
9 JurCAR19-IL-18、JurCAR19-IL-21细胞激活后体外增殖能力检测
10 CAR-T细胞制备
11 CAR19-IL18-T、CAR19-IL21-T细胞体外杀伤功能检测
12 CAR19-IL18-T、CAR19-IL21-T细胞活化水平检测
四、讨论
第三章 结论
附录
参考文献
致谢
本文编号:3792656
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