肝复康和丹参对肝纤维化wnt经典通路的影响

发布时间：2017-05-20 17:23

  本文关键词：肝复康和丹参对肝纤维化wnt经典通路的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:wnt/β-catenin是一种能维持组织器官稳态的高度保守的信号系统。近来研究显示异常wnt/β-catenin信号通路与肝脏纤维组织增生的发生发展有密切联系,表明它可能是中医药物作用于肝脏纤维化新的治疗靶点。肝复康是我校病理生理教研室经过反复实验总结出的中药防治肝纤维化经验方。它具有改善肝脏功能、延缓脂肪变性等效用。丹参是一种具有改善肝脏组织微循环,促进细胞代谢的单味中药。CCL4诱导的大鼠肝纤维化模型饲养一段时间后,取大鼠肝脏组织进行实验。模型组、肝复康治疗组和丹参治疗组的比较是为了观察肝复康和丹参是否能改善肝纤维化病理学形态结构,减少肝星状细胞活化标志α平滑肌肌动蛋白的含量,抑制促纤维化通路wnt/β-catenin靶基因的表达。正常对照组、肝复康对照组和丹参对照组的比较是研究肝复康和丹参能否对正常肝脏wnt经典通路产生活化影响而有促肝纤维化毒性。本次试验通过以上六个组别的设立来探讨肝复康和丹参对肝纤维化wnt/β-catenin的作用机制并对丹参和肝复康干预肝纤维化wnt/β-catenin通路的效果进行比较。大连医科大学动物实验中心提供60只健康SD大鼠,清洁级,体重200-250克(雌雄不限)。正常喂养一周后,随机分为丹参治疗组(D)、肝复康对照组(GC)、丹参对照组(DC)、正常对照组(C)、模型组(M)和肝复康治疗组(MG)各10只。除对照组外,其余大鼠每周两次皮下注射橄榄油稀释的10%的CCl4溶液(5ml/kg),共8周。肝复康对照组、丹参对照组和正常对照组以同样方法皮下注射生理盐水共8周。药物对照组、丹参治疗组和肝复康治疗组于造模第四周起开始分别用丹参2.5ml/kg/天和肝复康4.16ml/kg/天灌胃大鼠,持续到第8周。肝复康和丹参药物浓度分别为315mg/kg和250mg/kg。以上各剂量药物均溶于10ml/kg的生理盐水中。于8周末处死各组大鼠,即刻切取肝组织。一部分用10%的甲醛固定并制成石蜡切片,HE染色后光镜下观察其形态结构。另一部分于-80℃冰箱保存用于分子生物学检测。免疫组织化学法观察和定位α平滑肌肌动蛋白的分布、表达及含量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、Tcf-4、β-连环蛋白(β-catenin)、wnt1、wnt3a的表达水平。β-连环蛋白用免疫蛋白印迹(Western blot)方法检测。SPSS17.0软件包应用多种统计学方法处理实验数据。P0.05为差异有意义,P0.01为差异有显著性意义。方法:结果:观察各组大鼠精神状态,进食及运动情况。处死后观察各组大鼠大体肝脏情况。HE染色结果显示模型组大鼠肝细胞水肿和脂肪变性,假小叶形成。丹参对照组、肝复康对照组和正常对照组肝小叶结构清晰完整。肝复康治疗组肝小叶结构明显改善,细胞脂肪变性减少。丹参治疗组效果不明显。免疫组化半定量显示肝复康治疗组大鼠肝组织α-SMA的累计光密度值明显低于模型组并具有统计学意义(P0.01),丹参治疗组大鼠肝组织α-SMA的累计光密度值与模型组无显著性差异,丹参对照组、肝复康对照组和正常对照组三者α-SMA的累计光密度值无显著性差异。模型组α-SMA较丹参对照组、正常对照组、肝复康对照组显著增加(P0.01)。CCL4处理过的模型组进行RT-PCR结果显示,wnt1、wnt3a、Cyclin D1、Tcf-4、β-catenin的m RNA较丹参对照组、正常对照组、肝复康对照组显著增加(P0.01),肝复康对照组、丹参对照组和正常对照组三者比较无显著性差异,肝复康治疗组m RNA比模型组明显下降(P0.05),丹参治疗组与模型组比较无显著性差异。Western blot结果显示β-catenin在肝复康对照组、丹参对照组和正常对照组表达最少,对照组表达明显低于丹参治疗组与模型组(P0.01),肝复康治疗组与模型组相比表达明显下调(P0.05)。结论:1.肝复康和丹参对正常大鼠肝脏组织wnt经典通路无影响。2.肝复康能抑制wnt经典通路靶基因的表达来达到延缓脂肪变性和抑制纤维细胞增殖的目的。3.中药肝复康抑制大鼠肝纤维化程度比丹参效果理想。
【关键词】：肝纤维化 wnt经典信号通路 肝复康 丹参
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-14
• 材料和方法14-22
• 1.材料14-15
• 1.1 药物14
• 1.2 动物14-15
• 1.3 主要试剂15
• 1.4 主要仪器15
• 1.5 主要应用软件15
• 2.方法15-22
• 2.1 药物的制备15-16
• 2.2 实验动物模型的制备、分组及处理16
• 2.3 免疫组织化学分析16-18
• 2.4 肝组织逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）18-20
• 2.5 肝组织总蛋白的提取及Western印迹杂交20-22
• 2.6 统计学分析22
• 结 果22-30
• 1.肝组织形态学变化22-24
• 2.中药肝复康和丹参对α-SMA蛋白的表达的影响24-26
• 3.经典wnt通路中代表性的wnt配体的表达26-27
• 4.经典wnt通路β-catenin和转录因子Tcf-4 的表达27-28
• 5.经典wnt信号转导通路靶基因CyclinD1的表达28-29
• 6.Western blot检测wnt/β-catenin中β-catenin的表达29-30
• 讨论30-34
• 结论34-35
• 参考文献35-39
• 文献综述39-53
• 参考文献47-53
• 攻读学位期间发表论文情况53-54
• 致谢54-55

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  本文关键词：肝复康和丹参对肝纤维化wnt经典通路的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：382345