蛇莓提取物抗单纯疱疹病毒的有效部位研究

发布时间：2017-05-23 11:12

  本文关键词：蛇莓提取物抗单纯疱疹病毒的有效部位研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:通过蛇莓体外抗病毒效果,筛选出敏感病毒株,从蛇莓中提取分离出具有体外抗单纯疱疹病毒(HSV-1)活性的有效部位,通过体内实验验证该有效部位的抗病毒效果,并初步探讨该有效部位抗HSV-1的作用机制。方法:采用中性红染色法和观察细胞病变(CPE)法检测蛇莓提取物的体外灭活病毒作用,并以体外抗病毒治疗指数(TI)为指标,对蛇莓的抗病毒谱进行筛选,确立其病毒敏感株;将蛇莓水提液进行醇沉工艺优化,得到最佳醇沉工艺;选取三种类型大孔吸附树脂对蛇莓上清液进行分离,以体外抗病毒治疗指数(TI)为指标,筛选出最佳的大孔吸附树脂;蛇莓上清液经过D101大孔树脂吸附后,依次用水、25%乙醇进行洗脱,以体外抗病毒治疗指数(TI)为指标,得到抗病毒有效部位,然后采用制备薄层分离,进一步确定其有效部位;用HSV-1建立小鼠肝炎模型,对蛇莓有效部位体内抗病毒活性进行评价;建立4种形式的病毒-细胞感染模型,对有效部位的抗HSV-1作用机制进行初步探讨。结果:在体外抗病毒谱筛选实验中,蛇莓提取物抗HSV-1的作用最为明显,其治疗指数(TI)是15.09;最佳醇沉工艺为药液浓缩比1:1.3,醇沉浓度为60%,醇沉时间为24h;使用三种类型的大孔吸附树脂对上清液进行分离,得出D101型大孔树脂抗病毒效果较好;通过大孔树脂及制备薄层分离得到斑点部位有显著抗病毒效果,TI为51.34。以HSV-1建立小鼠肝炎模型,经灌胃给药,取蛇莓组肝组织与病毒组比较,从肝组织外观可以观察到肝组织的病变程度有所减轻,通过动物肝组织病理指数分析,蛇莓组与病毒模型组相比(P=0.0270.05)有显著性差异。斑点部位抗HSV-1的作用机制结果发现该有效部位对病毒无直接杀灭作用,而是对病毒的穿入产生影响,减少细胞与病毒的结合,其次可能是对HSV-1的某功能蛋白产生了影响,抑制了病毒的反转录,复制过程。结论:本实验以体外抗病毒治疗指数(TI)为评价指标,对蛇莓中抗病毒活性部位逐步分离纯化,通过体内实验发现斑点部位可以抑制由HSV-1引起的小鼠肝组织感染,表明其具有较为显著的体内抗病毒的作用。该有效部位可阻止病毒的穿入,并可抑制病毒的生物合成,但无直接杀伤作用。
【关键词】：蛇莓 单纯疱疹病毒 提取分离 有效部位 抗病毒
【学位授予单位】：山东中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285;R284.2
【目录】：

• 提要3-4
• Abstract4-10
• 引言10-11
• 实验综述11-25
• 1 蛇莓的研究概况11-16
• 1.1 蛇莓的形态特征及资源分布11
• 1.2 蛇莓的化学成分11-13
• 1.3 蛇莓的药理作用13-14
• 1.4 蛇莓的临床应用14-16
• 1.5 蛇莓的毒副作用16
• 2 单纯疱疹病毒的研究概况16-23
• 2.1 HSV的生物学特性及结构17
• 2.2 HSV发病机制17-19
• 2.3 HSV疫苗研究的现状19-20
• 2.4 化学药物治疗HSV现状20-21
• 2.5 中草药抗HSV现状21-23
• 3 课题研究内容23-24
• 4 技术路线24-25
• 实验研究25-52
• 第一部分 蛇莓体外抗病毒的筛选25-30
• 1 实验材料25-26
• 1.1 仪器25
• 1.2 药品与试剂25-26
• 1.3 细胞株26
• 1.4 病毒株26
• 1.5 培养液26
• 2 实验方法26-28
• 2.1 蛇莓提取液的制备26
• 2.2 阳性对照药物的制备26
• 2.3 病毒滴度的测定26-27
• 2.4 抗病毒实验27-28
• 3 实验结果28-29
• 3.1 各病毒TCID50的测定28
• 3.2 药物抗病毒筛选结果28-29
• 4 讨论29-30
• 第二部分 蛇莓水提液醇沉工艺优化30-33
• 1 实验材料30
• 1.1 实验仪器30
• 1.2 药品与试剂30
• 1.3 细胞株与病毒株30
• 1.4 培养液30
• 2 实验方法30-31
• 2.1 醇沉工艺正交试验30
• 2.2 体外抗病毒实验30-31
• 3 实验结果31-32
• 4 讨论32-33
• 第三部分 大孔吸附树脂的筛选33-37
• 1 实验材料33
• 1.1 实验仪器33
• 1.2 药品与试剂33
• 1.3 细胞株与病毒株33
• 1.4 培养液33
• 2 实验方法33-35
• 2.1 大孔吸附树脂的预处理33
• 2.2 样品溶液的制备33-34
• 2.3 上样及洗脱34
• 2.4 体外抗病毒实验34-35
• 3 实验结果35
• 4 讨论35-37
• 第四部分 蛇莓有效部位的精制及鉴定37-42
• 1 实验材料37
• 1.1 实验仪器37
• 1.2 试剂与药品37
• 1.3 细胞株与病毒株37
• 1.4 培养液37
• 2 实验方法37-40
• 2.1 D101大孔树脂的分离37-38
• 2.2 制备薄层分离38-40
• 2.3 斑点部位的理化鉴定40
• 3 实验结果40-41
• 3.1 薄层分离有效部位40-41
• 3.2 斑点部位鉴别结果41
• 4 讨论41-42
• 第五部分 蛇莓有效部位的体内抗病毒实验42-49
• 1 实验仪器与材料42
• 1.1 仪器42
• 1.2 药品与试剂42
• 1.3 病毒株42
• 1.4 动物42
• 2 实验方法42-44
• 2.1 病毒ID50的测定42
• 2.2 蛇莓有效斑点对小鼠毒性的测定42-43
• 2.3 药物体内抗病毒试验43-44
• 2.4 统计学方法44
• 3 实验结果44-48
• 3.1 病毒ID50的测定44
• 3.2 斑点部位对小鼠毒性的测定44
• 3.3 药物体内抗病毒实验44-48
• 4 讨论48-49
• 第六部分 有效部位抗HSV-1 机理的初步研究49-52
• 1 实验仪器与材料49
• 1.1 仪器49
• 1.2 药品与试剂49
• 1.3 细胞株与病毒株49
• 1.4 培养液49
• 2 实验方法49-50
• 2.1 制备多孔板内单层细胞49
• 2.2 病毒扩增49-50
• 2.3 药物对细胞的毒性测定50
• 2.4 药物体外抗HSV-1 机理实验50
• 3 实验结果50-51
• 4 讨论51-52
• 结语52-54
• 参考文献54-59
• 致谢59-60
• 附录60-65
• 详细摘要65-69

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本文编号：387769