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硅胶-层析联用法纯化汉逊酵母HBsAg与疫苗颗粒完整性研究

发布时间:2024-02-15 11:26
  乙型肝炎(Hepatitis B)由乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)引起,是全球最常见的传染病之一。我国每年因乙肝感染导致死亡的人数约占全球HBV感染相关死亡人数的近50%。接种乙肝疫苗是目前防控乙型肝炎的最重要策略。乙型肝炎表面抗原(HBsAg)是乙肝疫苗的主要活性物质。HBsAg是由多个单体通过二硫键形成的球形病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),作为一种多聚亚基蛋白,HBsAg稳定性较差,尤其是在纯化过程中,因其易发生解聚或聚集等结构变化而造成活性损失,导致产率下降,对乙肝疫苗大规模生产造成极大的负面效应。保护抗原的完整性是解决这一问题的重要手段之一。基于此,本文使用硅胶进行初步吸附/解吸附实验,发现其可增强抗原颗粒稳定性和完整性;进一步探究不同pH条件下的抗原颗粒稳定性,基于此,对硅胶实验中吸附与解吸附步骤进行优化,得到最佳的纯化方案;再与组合层析联用进一步纯化抗原,采用穿透式离子交换层析,保护抗原结构,提升层析纯化中抗原的活性收率。如下所述:1、在硅胶对抗原颗粒稳定性和完整性分析研究中,对细胞破碎液进行硅胶处理,将洗脱液进...

【文章页数】:84 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

图2.2两种疏水层析洗脱峰电泳图??(1?.Marker:?2.硅胶-疏水层析洗脱峰:3.疏水层析洗脱峰)??.-oeuton??

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图2.3两中疏水层析洗脱峰的HPSFC谱图??l'ig?2.3?IIPSl'C?ofl?IBsAg?eluenl?from?two?purification?nictliods??

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HBsAg的颗粒状结构是在下游纯化过程屮形成的,对比有无硅胶纯化步骤,可??以推断硅胶有无促进颗粒形成的作用。冈此在疏水U析前加入硅胶步骤,利用HPSEC??对两种纯化方式获得抗原颗粒进行完整性分析,若完整性提高,则表明硅胶具有促进??颗粒形成的作用。抗原完整分+量大于2000?....


图2.4丨IBsAg颗粒稳定性分析??Fig.2.4?Particle?stability?analysis?of?HBsAg??

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硅胶确实会促进HBsAg的颗粒的形成,但是硅胶促进??形成的颗粒是否是稳定,还需要进一步的实验。十二烷基磺酸钠可以断开抗原亚基之??间的非共价键连接,组装完整的抗原颗粒会因此解聚形成分子量仅有24?KDa的亚基,??因此分别向硅胶吸附/解吸附与疏水层析联用法和常规疏水层析法纯化得....


图3.8不同吸附pi?I对硅胶解吸附液中抗原颗粒占比的影响??Fig?3.8?Etlect?ordifferent?adsorption?pH?on?the?proportion?o?

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本文编号:3899666

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