雪旺细胞来源外泌体通过默克尔细胞中Piezo2离子通道在全层皮肤创面触觉恢复中的作用

发布时间：2024-03-09 12:00

　　目的:默克尔细胞在皮肤的触觉传导机制中起着重要的作用。雪旺氏细胞(SCs)是创伤后神经纤维再生的重要细胞。外泌体中的各种因子可以促进创面愈合。触觉功能障碍是否与全层皮肤缺损中默克尔细胞(MCs)缺失或Piezo2离子通道功能障碍有关,外泌体又是否可以促进创面触觉的恢复,其分子机制尚不清楚。本研究旨在通过MCs中Piezo2离子通道的功能来确定雪旺氏来源的外泌体是否在全层皮肤创面触觉恢复中发挥作用。方法:1)采用消化法从与动物模型同基因型新生SD大鼠皮肤内和坐骨神经内分别提取、培养MCs和SCs,采用免疫荧光法及WB测定MCs中CK20及Piezo2和SCs中S-100、GFAP及P75的表达。ELISA法检测培养至第0d、2d、4d、6d的MCs中分泌CGRP情况。2)提取SCs和MCs(control组)外泌体分别与MCs共培养,分为三组:MCs组、MCs+exosome+control组和MCs+exo-SCs组;提取三组中蛋白检测Piezo2的含量并在RNA水平上检测Piezo2 m RNA的表达。用WB法及q PCR法检测MCs组、MCs+SCs组及MCs+SCs+GW4869...

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.免疫荧光检测MCs标志性蛋白CK20：免疫荧光检测CK20蛋白在MCs和成纤维细胞中的相对表达（标尺=50μm）

遵义医科大学硕士学位论文谭昊362结果2.1MCs和SCs的培养鉴定。2.1.1MCs的培养鉴定：采用酶消化法从新生SD大鼠体内获得MCs。用皮肤成纤维细胞作为对照组，将培养6d的Merkel细胞和成纤维细胞爬片做CK20免疫荧光检测：免疫荧光成像显示CK20在MCs中呈强阳性，....

图2.WB检测在MCs标志性蛋白CK20：CK20蛋白在MCs和成纤维细胞中的相对表达，GAPDH作为内参(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,n=3pergroup)

遵义医科大学硕士学位论文谭昊37图2.WB检测在MCs标志性蛋白CK20：CK20蛋白在MCs和成纤维细胞中的相对表达，GAPDH作为内参(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,n=3pergroup)。Piezo2离子通道是默克尔细胞表达的典型的触觉感受器。为....

图3.WB和qPCR检测Piezo2在MCs和成纤维细胞中的相对表达：A.Piezo2蛋白在MCs和成

遵义医科大学硕士学位论文谭昊37图2.WB检测在MCs标志性蛋白CK20：CK20蛋白在MCs和成纤维细胞中的相对表达，GAPDH作为内参(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,n=3pergroup)。Piezo2离子通道是默克尔细胞表达的典型的触觉感受器。为....

图4.ELISA和检测MCs和成纤维细胞中分泌的CGRP的含量：(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,n=3pergroup)

遵义医科大学硕士学位论文谭昊38纤维细胞中的相对表达，GAPDH作为内参；B.Piezo2的mRNA在MCs和成纤维细胞中的相对表达(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,n=3pergroup)。Merkel细胞可分泌降钙素基因相关肽(CGRP)，参与调节组织....

本文编号：3923393