下调肿瘤细胞PD-L1表达的中药单体的筛选及其对T细胞肿瘤杀伤促进作用的研究

发布时间：2024-03-16 19:51

　　程序性细胞死亡配体-1(PD-L1/B7-H1)是存在于多种肿瘤细胞细胞膜上高表达的一种跨膜蛋白。它可以与效应T细胞上的PD-1(程序性细胞死亡因子1)蛋白结合,传导免疫抑制信号,抑制免疫效应T细胞的活性,有利于肿瘤细胞的生长和逃逸。已有的研究表明PD-L1免疫检查点抑制剂能特异性地与PD-L1结合,阻断PD-1/PD-L1通路,解除对T细胞活性的抑制,从而增强机体的抗肿瘤免疫力(提高T细胞杀伤肿瘤的能力),进而达到抗肿瘤的效果。然而临床研究发现免疫检查点抑制剂也存在一些临床局限性。PD-L1在细胞中的表达受一些内在机制的调控,如:FOXO、NF-κB、HIF-1、STAT3、SRF以及STAT1等信号通路的调控。肿瘤细胞内组成型致癌因素会通过这些信号通路促进PD-L1的过度表达。实验目的:鉴于免疫检查点抑制剂在临床应用过程中存在一些局限性,本研究拟从调控PD-L1表达的信号通路着手,尝试降低肿瘤细胞细胞膜表面PD-L1的表达水平。整个课题分为以下六个部分:1)利用各信号通路抑制剂检测各信号通路对PD-L1表达的调节作用;2)信号通路报告基因筛选体系的构建;3)利用构建的报告基因体系对...

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摘要
ABSTRACT
英文缩略词表
第一章 文献综述
    1. PD-1/PD-L1与T细胞肿瘤抑制的关系
        1.1 肿瘤的形成及危害
        1.2 T细胞及NK细胞对肿瘤的抑制作用
        1.3 PD-L1免疫检查点
    2. 中医药抗癌研究
    3. 中药与PD-L1的相关研究
第二章 前言
第三章 材料和方法
    1. 实验材料
        1.1 质粒、菌株和细胞株
        1.2 试剂
        1.3 耗材
        1.4 仪器
        1.5 溶液配制
    2. 实验方法
        2.1 细胞培养
        2.2 下调肿瘤细胞PD-L1表达的信号通路的筛选
        2.3 信号通路报告基因筛选体系的构建
        2.4 筛选下调转录因子STAT3的中药单体
        2.5 流式细胞术验证药物对肿瘤细胞PD-L1的下调作用
        2.6 T细胞-肿瘤细胞杀伤实验
        2.7 中药单体辅助裸鼠尾静脉回输CTL杀伤肿瘤
第四章 实验结果
    1. 下调肿瘤细胞MDA-MB-231细胞PD-L1表达的信号通路的筛选
        1.1 肿瘤细胞MDA-MB-231表面PD-L1表达量检测
        1.2 下调肿瘤细胞MDA-MB-231细胞PD-L1表达的信号通路的筛选
    2. 信号通路报告基因筛选体系的构建
        2.1 STAT3转录因子报告基因筛选体系的构建
        2.2 STAT1转录因子报告基因筛选体系的构建
        2.3 ISRE(STAT1/2)转录因子报告基因筛选体系的构建
        2.4 下调STAT3转录活性的中药单体化合物的筛选
    3. 流式细胞术验证药物对肿瘤细胞PD-L1的下调作用
    4. T细胞-肿瘤细胞杀伤
        4.1 T细胞扩增及验证
        4.2 双功能抗体构建
        4.3 T细胞-肿瘤细胞杀伤
    5. 中药单体辅助裸鼠尾静脉回输CTL杀伤肿瘤
第五章 讨论
第六章 结论
第七章 创新点与展望
参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3930024