重组结核分枝杆菌融合蛋白PstS1-Hsp16.3诊断结核病的研究

发布时间：2024-04-02 22:33

　　目的:克隆并表达结核分枝杆菌重组融合蛋白Pst S1-Hsp16.3,建立基于重组融合蛋白Pst S1-Hsp16.3的纳米金免疫传感器和可视化免疫传感器,评价其诊断结核病的效率。方法:根据Gen Bank中结核分枝杆菌标准株H37Rv的pst S1和hsp16.3基因序列分别设计并合成引物,PCR扩增pst S1和hsp16.3基因片段,重叠延伸PCR技术扩增融合基因pst S1-hsp16.3,克隆至p MD18-T载体,挑取菌落进行菌落PCR和测序鉴定后,亚克隆至原核表达载体p ET-28a(+),将序列正确的重组质粒DNA转化至E.coli Resseta(DE3),诱导表达融合蛋白Pst S1-Hsp16.3,金属螯合层析纯化,免疫印迹法分析其反应原性。晶种成长法制备金纳米棒,经11-巯基十一烷酸(MUA)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)化学修饰后,与融合蛋白Pst S1-Hsp16.3连接,构建纳米金免疫传感器检测血清抗体。谷胱甘肽还原法制备金纳米簇,经EDC、NHS化学修饰后,与羊抗人Ig G抗体连接,以Pst S1...

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
1.引言
2.材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌种及血清
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要溶液的配制
    2.2 方法
3.结果
    3.1 融合基因pst S1-hsp16.3 的扩增
    3.2 p MD18-T-pst S1-hsp16.3 的筛选与鉴定
    3.3 重组质粒p ET-28a(+)-pst S1-hsp16.3 的酶切鉴定
    3.4 Pst S1-Hsp16.3 的诱导表达及纯化
    3.5 Pst S1-Hsp16.3 的反应原性分析
    3.6 金纳米棒的制备
    3.7 金纳米棒的抗原修饰
    3.8 金纳米棒免疫传感器检测血清抗体
    3.9 金纳米簇的制备
    3.10 金纳米颗粒显色条件的优化
    3.11 金纳米簇可视化免疫传感器检测血清抗体
4.讨论
5.结论
参考文献
综述
    参考文献
附录1:中英文缩略词表
附录2:在校期间发表论文
致谢



本文编号：3946303