弓形虫rTgPRF蛋白疫苗的制备及其保护性研究

发布时间：2024-05-19 22:39

　　目的:本研究根据课题组前期建立的免疫程序制备抗rTgPRF多克隆抗体并体外监测其对正常细胞及弓形虫感染细胞生长、坏死和凋亡的影响。通过体内实验评价rTgPRF脂质体或rTgPRF联合弗氏佐剂免疫C57BL/6J小鼠后特异性抗体及CD4+/CD8+的变化,并进一步评估两种免疫方式对弓形虫感染小鼠的生存期、组织病理、生殖激素、细胞因子以及凋亡相关蛋白水平的影响,进而探讨rTgPRF疫苗的保护效力及机制,为其进一步的应用开发提供理论支撑和实验依据。方法:将pET30a(+)-TgPRF质粒转入E.coli BL21(DE3)中大量表达rTgPRF蛋白,通过AKTA系统经Ni柱和阴离子柱纯化后冷冻干燥。首先,制备抗rTgPRF多克隆抗体并检测其体外活性,将BALB/C-3T3成纤维细胞进行铺板后分别加入抗rTgPRF血清(1:40)或兔免疫前血清(1:40),正常对照仅补充培养基,用Incucyte Zoom^TM系统间隔1 h动态监测抗rTgPRF抗体对正常细胞生长、坏死和凋亡的影响。抗rTgPRF抗体对弓形虫感染细胞的影响同样进行了检测,将细胞铺板后预培养12 h,未感...

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1rTgPRF蛋白AKTA纯化峰值图注：A：His-亲和层析纯化；B：Q离子柱交换层析纯化；红色圆圈标记为目的蛋白峰Fig.1rTgPRFproteinAKTApurificationpeakdiagramNote:A:His-affinitychromatographypurification;B:PurificationbyQ-ion-exchangechromatography;Redcirclemarkedastargetprotein

遵义医科大学硕士学位论文郭珊珊303结果3.1rTgPRF蛋白表达纯化及冻干对重组蛋白进行His-亲和层析纯化洗脱可发现当洗脱液浓度依次为7%、15%、50%时各出现一峰(图1A)，收集蛋白进行SDS-PAGE凝胶电泳分析显示，15%处所收集蛋白大小约为23kD(图2A)，为目的....

图2rTgPRF蛋白SDS-PAGE电泳图A:未冻干蛋白，B:冻干蛋白；M:蛋白分子量标准，rTgPRF:蛋白Fig.2SDS-PAGEelectrophoresisofrTgPRFproteinA:Nonlyophilizedprotein,B:lyophilized

遵义医科大学硕士学位论文郭珊珊31图2rTgPRF蛋白SDS-PAGE电泳图A:未冻干蛋白，B:冻干蛋白；M:蛋白分子量标准，rTgPRF:蛋白Fig.2SDS-PAGEelectrophoresisofrTgPRFproteinA:Nonlyophilizedprotein,B....

图3抗rTgPRF抗体作用细胞后细胞生长(A)、坏死(B)及凋亡(C)注：*表示P<0.05Fig.3Cellgrowth(A)、necrosis(B)andapoptosis(C)afterantirTgPRFantibodytreatment

遵义医科大学硕士学位论文郭珊珊32图3抗rTgPRF抗体作用细胞后细胞生长(A)、坏死(B)及凋亡(C)注：*表示P<0.05Fig.3Cellgrowth(A)、necrosis(B)andapoptosis(C)afterantirTgPRFantibodytreatment....

图4体外培养BALB/C-3T3成纤维细胞84h坏死和凋亡的荧光图注：细胞坏死用YOYO-1探针标记为红色荧光；凋亡用Caspase-3/7探针标记为绿色荧光

遵义医科大学硕士学位论文郭珊珊32图3抗rTgPRF抗体作用细胞后细胞生长(A)、坏死(B)及凋亡(C)注：*表示P<0.05Fig.3Cellgrowth(A)、necrosis(B)andapoptosis(C)afterantirTgPRFantibodytreatment....

本文编号：3978556