紫花牡荆素对MHCC97-H源性肝癌干样细胞性质和miR-139-5p表达的影响

发布时间：2024-06-02 06:15

　　目的:阐明紫花牡荆素(casticin,CAS)通过调控miR-139-5p的表达,从而抑制MHCC97-H源性肝癌干样细胞(liver cancer stem-like cells,LCSLCs)干性的机制。方法:1.球形成培养法从体外培养MHCC97-H细胞系获得球形成细胞用作MHCC97-H源性LCSLCs模型。分别采用流式细胞术、球形成试验、软琼脂集落形成试验、创口愈合实验、transwell小室侵袭实验、q RT-PCR和蛋白印迹分析MHCC97-H细胞和球形成细胞CD24+、CD44+、CD90+细胞百分率、自我更新能力、迁移和侵袭能力以及干细胞表面标志物CD24、CD44、CD90和干性相关因子ABCG2、Nanog、Ep CAM m RNA和蛋白表达水平。q RT-PCR检测L-02细胞、MHCC97-H细胞与LCSLCs miR-139-5p表达水平。2.分别利用miR-139-5p mimic(50 n M)或inhibitor(100 n M)转染LCSLCs操纵miR-139-5p表达水平,测定miR-139-5p对LCSLCs干性的作用。3.以DMSO为阴性(...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
1 前言
2 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 实验仪器
        2.1.2 实验试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养与扩增
        2.2.2 肿瘤球细胞培养
        2.2.3 软琼脂集落形成试验
        2.2.4 创口愈合实验
        2.2.5 transwell小室细胞侵袭实验
        2.2.6 流式细胞术分析
        2.2.7 实时定量PCR检测(qRT-PCR)
        2.2.8 CCK-8实验
        2.2.9 蛋白质印迹分析
        2.2.10 统计学分析
3 结果
    3.1 MHCC97-H源性LCSLCs制备和鉴别及mi R-139-5p表达
        3.1.1 MHCC97-H源性LCSLCs制备和鉴别
        3.1.2 miR-139-5p表达
    3.2 miR-139-5p抑制LCSLCs干性的作用研究
        3.2.1 miR-139-5p mimic对 LCSLCs干性的影响
        3.2.2 miR-139-5p inhibitor对 LCSLCs干性的影响
    3.3 CAS抑制LCSLCs干性的作用研究
        3.3.1 CAS对 LCSLCs干性的影响
    3.4 CAS联合miR-139-5p mimic转染抑制LCSLCs干性的作用机制研究
        3.4.1 CAS对 LCSLCs mi R-139-5p表达的影响
        3.4.2 CAS联合miR-139-5p mimic转染对LCSLCs干性的影响
4 讨论
5 结论
参考文献
附录1:英文缩略词索引
附录2:综述
    参考文献
攻读硕士学位期间主要研究成果
致谢



本文编号：3986973