C末端缺失的GATA4通过增强AKT/FOXO的表达促进心肌细胞凋亡

发布时间：2024-06-12 00:20

　　目的:GATA4是参与心脏发育的重要转录因子。本课题组前期在室间隔缺损(ventricular septal defect,VSD)患者心肌组织中发现了一种特殊类型的GATA4突变(p.S335X),此突变可使终止密码子提前产生,导致GATA4的C末端缺失。为进一步了解p.S335X突变对心肌细胞的作用及其机制,我们使用体外培养的大鼠心肌细胞株H9C2,转染野生型GATA4(pcDNA6-GATA4-WT,WT)及突变型GATA4p.S335X(pcDNA6-GATA4-MU,MU)载体,验证转染效率后,考察GATA4 p.S335X对H9C2细胞凋亡的影响及经典凋亡通路AKT/FOXO/Bcl-2的参与作用。在此基础上,我们进一步筛选了除经典Bcl-2凋亡途径之外,GATA4 p.S335X对其他凋亡相关的下游分子/信号通路的调控作用。方法:大鼠心肌细胞H9C2体外培养,转染WT、MU及对照(pcDNA6,EV)载体,通过收集转染后H9C2细胞的RNA和总蛋白,分别使用Real-Time PCR和Western blot验证细胞中GATA4 mRNA和蛋白表达,鉴定转染成功。进一步使...

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
前言
材料和方法
    一、材料与试剂
    二、实验方法
        2.1 Western Blot
        2.2 Real-Time PCR
            2.2.1 提取RNA
            2.2.2 逆转录
            2.2.3 Real-Time PCR
        2.3 细胞学实验
            2.3.1 细胞传代
            2.3.2 细胞冻存
            2.3.3 细胞复苏
            2.3.4 瞬时转染H9C2细胞
            2.3.5 TNF诱导H9C2细胞凋亡模型
        2.4 TUNEL
        2.5 PCR Array
            2.5.1 RNA提取
            2.5.2 逆转录
            2.5.3 RT2 Profile PCR Arrays
        2.6 统计分析
结果
    1 载体在H9C2细胞中表达
    2 载体初步功能测定
    3 GATA4 p.S335X对AKT/FOXO/Bcl-2通路的影响
    4 TNF诱导后GATA4 p.S335X对AKT/FOXO/Bcl-2通路的影响
    5 PCR Array筛选GATA4 p.S335X与野生型差异基因
讨论
结论和展望
参考文献
中文综述 转录因子与心肌细胞凋亡的关系
    参考文献
攻读学位期间发表的文章情况
致谢



本文编号：3992936