茶黄素提取物延缓AD转基因秀丽隐杆线虫中β淀粉样蛋白毒性研究

发布时间：2017-06-29 01:03

  本文关键词：茶黄素提取物延缓AD转基因秀丽隐杆线虫中β淀粉样蛋白毒性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：阿尔茨海默病是一种常见中老年神经退行性疾病。淀粉样蛋白病变对大脑产生毒性是AD发生的主要病因。本文通过研究茶黄素提取物延缓AD转基因秀丽隐杆线虫瘫痪行为及线虫体内相关基因表达情况,探讨茶黄素提取物抗β淀粉样蛋白毒性作用机制。线虫行为学瘫痪实验表明,茶黄素提取物能有效抑制AD转基因秀丽隐杆线虫CL2006(Aβ3-42)与GMC101(Aβ1-42)瘫痪。CL2006中,与对照组相比,10mg/L、 100mg/L、200mg/L与500mg/L茶黄素提取物处理组第8天未瘫痪率分别提高了14.33%、21.05%、8.19%与1,2.83%,各浓度茶黄素提取物抑制CL2006(Aβ3-42)瘫痪作用明显。茶黄素提取物预处理组GMC101中,与对照组相比,10mg/L、100mg/L、 200mg/L与500mg/L茶黄素提取物处理组未瘫痪率分别提高了4.92%、8.36%、9.67%与11.97%,各浓度茶黄素提取物对GMC101(Aβ142)瘫痪抑制效果均极显著(p0.01)。茶黄素提取物处理后立即升温组GMC101中,茶黄素提取物处理组与对照组相比无显著差异。通过测量线虫体长,与对照组相比,各浓度茶黄素提取物处理过的CL2006与GMC101体长均无显著性差异。茶黄素提取物对线虫生长发育无不良影响。RT-PCR检测线虫体内Aβ human、hsp-16.1、hsp-16.2、aip-1与amy-1基因表达情况,可知茶黄素提取物显著降低CL2006与GMC101线虫体内Aβ human表达情况。此外,茶黄素提取物上调CL2006(Aβ3-42)线虫体内热休克蛋白HSP-16.1与HSP-16.2的表达水平(P0.01)。与此相反,茶黄素提取物处理组GMC101(Aβ1-42)体内HSP-16.2水平无变化,HSP-16.1的表达水平下调(P0.05)。经茶黄素提取物处理过的GMC101中aip-1表达水平相比对照组显著降低(P0.01),而CL2006经茶黄素提取物处理后aip-1表达水平却显著较高(P0.01)。茶黄素提取物处理后,amy-1在GMC101中表达下调,效果极显著(P0.01),CL2006中的表达下调,效果显著(P0.05)。通过检测绿色荧光蛋白进一步研究茶黄素提取物抵抗Ap毒性机制,结果发现,茶黄素提取物可以显著提高CL2166(Pgst-4::GFP)线虫体内gst-4表达。
【关键词】：茶黄素提取物 阿尔茨海默病 β-淀粉样蛋白 秀丽隐杆线虫
【学位授予单位】：湖南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-11
• 第一章 绪论11-26
• 1.1 红茶主要化学成分11-12
• 1.1.1 红茶主要功效成分11
• 1.1.2 茶主要营养成分11-12
• 1.2 茶功效研究进展12-15
• 1.2.1 抗氧化作用12
• 1.2.2 抗肿瘤和预防癌症作用12-13
• 1.2.3 预防心血管疾病13
• 1.2.4 预防慢性炎症13-14
• 1.2.5 预防肥胖及代谢综合症14
• 1.2.6 预防神经退行性疾病14-15
• 1.3 阿尔茨海默病研究进展15-19
• 1.3.1 淀粉样蛋白假说15-16
• 1.3.2 Tau假说16
• 1.3.3 神经递质假说16
• 1.3.4 胆碱能假说16-17
• 1.3.5 神经血管学说17
• 1.3.6 炎症假说17
• 1.3.7 自由基与氧化应激假说17-18
• 1.3.8 金属离子假说18
• 1.3.9 胰岛素假说18-19
• 1.3.10 小结19
• 1.4 红茶及其功效成分作用于阿尔茨海默病机制的研究进展19-21
• 1.4.1 抑制毒性β淀粉样蛋白的形成19-20
• 1.4.2 抑制Aβ的聚集20
• 1.4.3 抵抗Aβ42聚集引起的脂质膜不稳定20
• 1.4.4 减弱Aβ纤维诱导的神经毒性20
• 1.4.5 抵抗Aβ诱导的活性氧自由基损伤20-21
• 1.4.6 流行病学研究21
• 1.5 秀丽隐杆线虫研究现状21-24
• 1.5.1 秀丽隐杆线虫21
• 1.5.2 秀丽隐杆线虫模式生物作为研究对象的优势21-22
• 1.5.3 秀丽隐杆线虫应用于AD研究进展22-24
• 1.6 研究目的与意义24-26
• 第二章 茶黄素提取物延缓AD转基因秀丽线虫瘫痪作用研究26-38
• 2.1 材料、试剂与仪器26-27
• 2.1.1 线虫品系26
• 2.1.2 主要材料及样品制备26
• 2.1.3 主要药品和试剂26-27
• 2.1.4 主要实验仪器27
• 2.2 实验方法27-31
• 2.2.1 主要工作液配制27-28
• 2.2.2 E.coli OP50的培养28-29
• 2.2.3 秀丽隐杆线虫的培养29
• 2.2.4 线虫瘫痪实验方法29-30
• 2.2.5 AD转基因秀丽线虫体长测量方法30
• 2.2.6 数据处理30-31
• 2.3 结果与分析31-36
• 2.3.1 茶黄素提取物延缓秀丽线虫CL2006(Aβ3-42)品系瘫痪31-32
• 2.3.2 茶黄素提取物延缓秀丽线虫GMC101(Aβ1-42)品系瘫痪32-34
• 2.3.3 茶黄素提取物对AD转基因秀丽线虫体长影响34-36
• 2.4 讨论36-37
• 2.5 小结37-38
• 第三章 茶黄素提取物延缓AD转基因秀丽线虫瘫痪机理研究38-51
• 3.1 材料、试剂与仪器38-39
• 3.1.1 线虫品系38
• 3.1.2 主要实验材料及样品制备38
• 3.1.3 主要药品和试剂38-39
• 3.1.4 主要实验仪器39
• 3.2 实验方法39-43
• 3.2.1 主要工作液配制39
• 3.2.2 转基因线虫绿色荧光蛋白可视化研究方法39-40
• 3.2.3 AD转基因线虫体内相关基因表达分析方法40-43
• 3.2.4 数据处理43
• 3.3 结果与分析43-48
• 3.3.1 茶黄素提取物对AD转基因线虫体内相关基因mRNA水平表达的影响43-47
• 3.3.2 转基因线虫品系绿色荧光蛋白荧光定量及可视化研究47-48
• 3.4 讨论48-50
• 3.5 小结50-51
• 第四章 全文总结51-52
• 4.1 主要研究结果51
• 4.2 创新点与展望51-52
• 参考文献52-65
• 致谢65-66
• 作者简历66

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