海螵蛸对胃粘膜损伤保护及其凝血、止血功效研究

发布时间：2017-07-13 18:17

  本文关键词：海螵蛸对胃粘膜损伤保护及其凝血、止血功效研究

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【摘要】：海螵蛸,又名乌贼骨,为传统中药材,具有抗胃溃疡、凝血、止血、成骨等生物活性。但是,在乌贼的加工过程中,海螵蛸通常被丢弃,造成资源浪费。如果能根据海螵蛸自身生物活性开发成新型药物或保健食品,不仅能变废为宝,而且更能产生良好的经济效益。本试验以海螵蛸为主要原料,采用先进的分析手段对海螵蛸的结构进行检测,验证海螵蛸胃粘膜损伤保护作用、凝血、止血活性,并研制出治疗胃溃疡的片剂。主要研究内容如下：1、海螵蛸物质结构及其主要成分的分析研究。采用环境扫描电镜、红外光谱、X射线衍射、电感耦合等离子体质谱4种手段对海螵蛸的结构进行检测并分析,初步探究其结构与部分生物活性的关系。经电镜扫描发现,海螵蛸腹面疏松层整体呈房架结构,由疏松多孔的壁龛样的网格结构形成。而粉碎后的海螵蛸,其网格结构完全被破坏。但是,经动物实验证实：粉碎后海螵蛸粉末仍具有保护胃粘膜损伤、凝血、止血的活性,这说明此网格结构与其凝血、止血、保护胃粘膜损伤活性关系不大。由红外扫描和X射线衍射分析可知：海螵蛸含有文石结构的碳酸钙,完整海螵蛸与其腹层相比化学成分基本相同,但文石含量不同。此外,通过电感耦合等离子体质谱检测,海螵蛸含70种无机元素,其中含大量的Ca,少量的Na、Sr、Fe、 P、K、 Mg,微量的Si、Zn、Cu、Al、Br、Ba、B、Mn、Ni等。2、海螵蛸对乙醇诱导的急性胃粘膜损伤的保护作用研究。在Wistar大鼠体内营造乙醇诱导的急性胃粘膜损伤模型,以不同剂量的海螵蛸对模型Wistar大鼠进行灌胃给药,测定胃粘膜的损伤面积、损伤指数、损伤抑制率、胃液体积、酸度、MDA、GSH、T-SOD、PEG2、MPO等指标,比较各组对乙醇诱导的急性胃粘膜损伤的保护效果。结果显示：海螵蛸具有保护乙醇诱导的胃粘膜损伤的作用。其作用机制可能是：海螵蛸中的钙与胃酸产生中和作用,提高胃液pH值,减轻其对胃粘膜侵蚀作用。同时,可调节胃粘膜组织中NO含量,加强胃粘膜的屏障功能；促进胃液、胃组织、血清中PGE2的合成,增强黏膜组织的抵抗能力,加速溃疡的愈合。此外,提高SOD的活力,清除氧自由基和减轻脂质过氧化反应,降低胃组织和血清中MDA的含量,减轻对胃粘膜细胞的损伤,不同程度的降低胃组织中MPO的活性,参与调节胃粘膜损伤的炎症反应,可能是其保护胃粘膜的另一机制。3、海螵蛸凝血作用效果研究。通过分析海螵蛸悬浮液对不同实验组小鼠出血时间和凝血时间的影响,验证其凝血效果,并对可能的凝血机制进行探讨,为新型海螵蛸药物的开发提供理论依据。结果表明,在250g/L剂量下,海螵蛸的出血时间和凝血时间分别比生理盐水对照组缩短11.45 mmin和1.38 min。海螵蛸各剂量组均能明显缩短小鼠的出血时间和凝血时间,且不同程度脱钙后的海螵蛸固形物组的出血时间和凝血时间与生理盐水对照组相比均差异极显著。这表明,不论海螵蛸中钙含量多寡,均具有凝血活性,且未脱钙海螵蛸的凝血效果最好,对剂量也有一定的依赖性。而单纯的碳酸钙却不具有凝血活性。海螵蛸能明显缩短凝血时间,提示海螵蛸凝血活性可能与各种凝血因子的含量及它们的功能有关。海螵蛸能明显缩短出血时间,这提示海螵蛸可能与血小板数胃粘膜损伤量、血小板的功能、毛细血管功能、组织因子数量及组织收缩力等有关。4、海螵蛸体外止血效果研究。通过小鼠试验,比较海螵蛸与其他常见的止血材料的止血性能。以豚鼠模型,评价海螵蛸粉末对豚鼠背部健康皮肤和破损皮肤产生刺激的反应,探究其致敏性。通过小鼠股动脉横切面止血试验,证实了超微粉碎海螵蛸止血时间最短为(1.21±0.11)min,止血速度短于云南白药和淀粉,止血效果理想。经豚鼠背部健康皮肤和破损皮肤的单次接触试验证明,海螵蛸粉末对皮肤无刺激性、无致敏性、安全性强。因此,海螵蛸具有良好的止血效果和无致敏性。5、海螵蛸片剂的制备工艺研究。通过单因素实验及正交试验优化影响片剂质量的因素条件,获得最佳的片剂配方：麦芽糊精1.0g、交联羧甲基纤维素钠(CCNa)添加量3%、硬脂酸镁添加量0.2%。按此配方,得到的片剂外观光洁,片重差异、崩解时间均符合药典要求且重现性好。
【关键词】：海螵蛸 生物活性 胃粘膜损伤 凝血 止血
【学位授予单位】：福建农林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 摘要9-11
• Abstract11-14
• 第一章 绪论14-25
• 1.1 海螵蛸的形态14
• 1.2 海螵蛸的结构14-15
• 1.3 海螵蛸的化学成分15
• 1.4 海螵蛸生物活性15-21
• 1.4.1 中和胃酸15-16
• 1.4.2 成骨16
• 1.4.3 降低血磷和甲状腺素16-17
• 1.4.4 凝血17-18
• 1.4.5 抗胃溃疡18-21
• 1.4.5.1 胃溃疡的成因18
• 1.4.5.2 建立溃疡模型的方法18-20
• 1.4.5.3 粘膜损伤评价方法20
• 1.4.5.4 海螵蛸抗溃疡的研究现状20-21
• 1.5 海螵蛸应用现状21-23
• 1.5.1 作组织支架的材料21
• 1.5.2 制备乳酸钙21
• 1.5.3 海螵蛸中甲壳素的研究利用21-22
• 1.5.4 海螵蛸中多糖的研究利用22
• 1.5.5 药剂应用22-23
• 1.6 本论文的研究意义及研究内容23-25
• 1.6.1 研究意义23
• 1.6.2 实验内容23-25
• 第二章 海螵蛸结构分析与主要化学成分测定25-32
• 2.1 材料与仪器25
• 2.1.1 材料与试剂25
• 2.1.2 实验仪器25
• 2.2 试验方法25-26
• 2.2.1 环境扫描电镜的测定25
• 2.2.2 红外光谱的测定25-26
• 2.2.3 X射线衍射的测定26
• 2.2.4 电感耦合等离子体质谱的测定26
• 2.3 结果与讨论26-31
• 2.3.1 环境扫描电镜的分析26-28
• 2.3.2 红外光谱的分析28-29
• 2.3.3 X射线衍射的分析29-30
• 2.3.4 电感耦合等离子体质谱的分析30-31
• 2.4 小结31-32
• 第三章 海螵蛸乙醇诱导的大鼠急性胃粘膜损伤保护作用研究32-50
• 3.1 材料与仪器32-33
• 3.1.1 试验材料32
• 3.1.2 实验仪器32-33
• 3.1.3 实验动物33
• 3.2 试验方法33-38
• 3.2.1 实验分组33
• 3.2.2 给药与造模33-34
• 3.2.2.1 给药33-34
• 3.2.2.2 造模34
• 3.2.3 标本采集与处理34-35
• 3.2.3.1 样本采集34
• 3.2.3.2 样本处理34-35
• 3.2.4 胃粘膜损伤指标35
• 3.2.4.1 胃粘膜损伤指数35
• 3.2.4.2 胃粘膜损伤抑制率35
• 3.2.4.3 胃粘膜损伤面积的测定35
• 3.2.5 胃液中胃液体积、胃液酸度、NO含量、PEG_2指标35-36
• 3.2.5.1 胃液体积的测定35-36
• 3.2.5.2 胃液酸度的测定36
• 3.2.5.3 胃液中NO含量的测定36
• 3.2.5.4 胃液中PEG_2含量的测定36
• 3.2.6 胃组织中MDA、GSH、T-SOD、PEG_2、MPO等指标36-37
• 3.2.6.1 胃组织中MDA含量的测定36
• 3.2.6.2 胃组织中GSH含量的测定36-37
• 3.2.6.3 胃组织中T-SOD含量的测定37
• 3.2.6.4 胃组织中MPO含量的测定37
• 3.2.6.5 胃组织中PEG_2含量的测定37
• 3.2.7 血清中MDA、T-SOD、PEG_2指标37-38
• 3.2.7.1 血清中MDA含量的测定37
• 3.2.7.2 血清中T-SOD含量的测定37-38
• 3.2.7.3 血清中PGE_2含量的测定38
• 3.2.8 统计分析38
• 3.3 结果与讨论38-48
• 3.3.1 海螵蛸对大鼠体重的影响38-39
• 3.3.2 海螵蛸对大鼠胃粘膜损伤的影响39-40
• 3.3.2.1 胃粘膜肉眼观察情况39
• 3.3.2.2 海螵蛸对胃粘膜损伤指数、抑制率、面积的影响39-40
• 3.3.3 海螵蛸对胃液体积、pH、NO等指标的影响40-42
• 3.3.4 海螵蛸对胃液、胃组织、血清中PEG_2指标的影响42-43
• 3.3.5 海螵蛸对胃组织、血清中MDA指标的影响43-45
• 3.3.6 海螵蛸对GSH指标的影响45-46
• 3.3.7 海螵蛸对胃组织、血清中T-SOD指标的影响46-47
• 3.3.8 海螵蛸对MPO指标的影响47-48
• 3.4 小结48-50
• 第四章 海螵蛸凝血作用效果研究50-58
• 4.1 材料与方法50-53
• 4.1.1 试验材料50
• 4.1.2 实验动物50-51
• 4.1.3 试验方法51-53
• 4.1.3.1 实验设计51-53
• 4.1.3.2 动物出血时间和凝血时间的测定测定53
• 4.1.4 统计分析53
• 4.2 结果与讨论53-57
• 4.2.1 海螵蛸对小鼠体重、尾长、出血时间、凝血时间的影响53-54
• 4.2.2 碳酸钙对小鼠体重、尾长、出血时间、凝血时间的影响54-55
• 4.2.3 不同含钙量海螵蛸对小鼠体重、尾长、出血时间、凝血时间的影响55-56
• 4.2.4 脱钙后的海螵蛸粉末对小鼠体重、尾长、出血时间、凝血时间的影响56-57
• 4.3 小结57-58
• 第五章 海螵蛸体外止血效果研究58-65
• 5.1 材料与仪器58-59
• 5.1.1 实验材料58
• 5.1.2 实验动物58-59
• 5.2 试验方法59-61
• 5.2.1 海螵蛸止血实验59
• 5.2.2 海螵蛸体外止血时间的测定59
• 5.2.3 海螵蛸皮肤刺激试验59-61
• 5.2.3.1 试验分组59
• 5.2.3.2 脱毛处理59-60
• 5.2.3.3 皮肤单次接触性试验60
• 5.2.3.4 致敏性观察60-61
• 5.3 结果与讨论61-64
• 5.3.1 海螵蛸止血效果验证61-62
• 5.3.2 海螵蛸的皮肤刺激性研究62-64
• 5.4 小结64-65
• 第六章 正交设计优化海螵蛸片剂的制备工艺65-72
• 6.1 材料与方法65-67
• 6.1.1 实验材料65
• 6.1.2 实验仪器与设备65-66
• 6.1.3 实验方法66-67
• 6.1.3.1 海螵蛸片剂的制备工艺流程66
• 6.1.3.2 崩解时间的测定66
• 6.1.3.3 片剂差异的测定66-67
• 6.1.3.4 单因素实验67
• 6.1.3.5 正交试验设计67
• 6.2 结果与分析67-71
• 6.2.1 单因素实验67-69
• 6.2.1.1 麦芽糊精添加量对片重差异、崩解时间、片剂外观的影响67-68
• 6.2.1.2 交联羧甲基纤维素钠添加量对片重差异、崩解时间、片剂外观的影响68
• 6.2.1.3 硬脂酸镁添加量对片重差异、崩解时间、片剂外观的影响68-69
• 6.2.2 海螵蛸片剂制备正交试验研究69-71
• 6.3 小结71-72
• 结论72-74
• 参考文献74-78
• 致谢78

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