芍药内酯苷临床前药代动力学研究

发布时间：2017-07-29 20:16

  本文关键词：芍药内酯苷临床前药代动力学研究

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【摘要】：芍药内酯苷(Albiflorin)又名白芍苷是毛莨科(Ranunculaceae)植物芍药(Paeonialacti flora Pall.)或赤芍(Paeoniaveitchii Lynch.)的干燥根提取物,属于单萜类化合物。有研究证明,芍药内酯苷具有镇痛、镇静、抗惊厥作用,调节免疫力,舒张平滑肌,抗炎等作用,此外其还有杀灭病原微生物和保护肝脏的作用。芍药内酯苷理作用广泛,近年来最新研究发现,芍药内酯苷具有抗抑郁作用,可促进睡眠、保护脑神经,其药理活性甚至超过了中药白芍中的主要成分芍药苷。所以,该化合物具有良好的开发前景,现拟申报一类新药。本研究工作旨在研究芍药内酯苷的药代动力学特性,为该化合物的临床研究以及剂型研发提供初步依据。目的 对芍药内酯苷的药代动力学特性进行较为全面的研究,获得其吸收、分布、排泄以及代谢酶的相关数据。方法利用LC-MS/MS技术对芍药内酯苷的生物样品进行检测,分析其血药浓度、组织药物浓度、排泄物药物浓度等。通过计算得到芍药内酯苷的药代动力学参数。利用体外肝微粒温孵技术,确定芍药内酯苷是否被细胞色素P450各个亚型所代谢,以及是否对细胞色素P450各个亚型有抑制或诱导作用。利用体外Caco-2细胞模型技术,研究芍药内酯苷的吸收特性。结果 建立了一种灵敏度高、专属性强、简单、快速的检测ICR小鼠和Beagle犬生物样品中芍药内酯苷分析方法。利用LC-MS/MS技术,直接沉淀蛋白法,进行生物样品的测定。生物基质不干扰芍药内酯苷的测定,经方法学验证,芍药内酯苷的在1-1000ng/mL线性范围良好,最低定量下限为1 ng/mL;该方法的日间和日内精密度小于(RSD)小于12%,方法准确度在93～107%之间,回收率在85%以上。小鼠单剂量口服芍药内酯苷(3.5 mg/kg、7 mg/kg、14 mg/kg)后于不同时间点从眼底静脉丛快速准确取血后,采用上述LC-MS/MS方法进行血药浓度检测,并绘制出血药浓度-时间曲线,采用DAS 2.0非房室模型法计算药物的药代动力学参数。结果表明,ICR小鼠在服用芍药内酯苷后吸收和消除较快,在10h左右消除完全消除,三个剂量组的Cmax、AUC(0-∞)均与剂量呈线性相关,符合一级消除动力学。ICR小鼠单剂量给药7 mg/kg后在10 min、1 h、6 h立即颈椎脱臼处死,测得各组织中药物浓度。结果表明在10 min时各组织已均有芍药内酯苷分部,除肠、胃、肾外其余组织含量均较低；1h时各组织含药浓度基本达峰；6h时各组织含药浓度均显著降低。所以,芍药内酯苷在各器官内无药物蓄积情况。Beagle犬单剂量口服芍药内酯苷(0.5 mg/kg、1 mg/kg、2 mg/kg)后测得药物的药代动力学参数。结果表明,比格犬在服用芍药内酯苷后吸收和消除较快,在10h左右消除完全消除,三个剂量组的Cmax、AUC (0-∞)均与给药剂量呈线性相关,符合一级消除动力学。Beagle犬在连续十天(每天口服一次)口服芍药内酯苷1 mg/kg,通过服药前监控血药浓度发现,在服药前芍药内酯苷在比格犬体内已经基本消除完全；通过最后一次给药后计算的药代动力学参数与单剂量给药的药代动力学参数相比较,发现多次给药与单次给药的药代动力学参数无差异。结果表明芍药内酯苷在多次服用时无药物蓄积现象。利用体外温孵技术,将芍药内酯苷与细胞色素P450各亚型及人肝原代细胞孵育,结果发现芍药内酯苷对P450酶各亚型和人肝原代细胞无诱导和抑制作用。利用Caco-2细胞模型,考察芍药内酯苷的吸收机制,结果发现芍药内酯苷的在Caco-2单细胞模型中吸收较差,外排率大于2。结论 芍药内酯苷在ICR小鼠和Beagle犬体内吸收、消除较快,吸收较差、生物利用度较低,在体内无蓄积作用,对P450酶各亚型和人肝原代细胞无诱导和抑制作用。
【关键词】：芍药内酯苷 药代动力学 临床前药代动力学 LC-MS/MS 组织分布 排泄 细胞色素P450 肝原代细胞 Caco-2细胞
【学位授予单位】：济南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 研究生指导老师4
• 课题指导小组成员4-10
• 摘要10-12
• ABSTRACT12-14
• 缩写符号说明14-15
• 前言15-17
• 第一章 白芍研究进展17-22
• 1.1 化学成分17-20
• 1.1.1 单萜及其苷类化合物17-18
• 1.1.2 三萜类化合物18
• 1.1.3 黄酮类化合物18
• 1.1.4 挥发油18-20
• 1.2 药理作用20-22
• 第二章 生物样品中的芍药内酯苷检测方法的建立22-29
• 2.1 材料22-23
• 2.1.1 药品和试剂22
• 2.1.2 实验仪器22
• 2.1.3 实验动物22-23
• 2.2 实验方法23-25
• 2.2.1 色谱条件23
• 2.2.2 质谱条件23
• 2.2.3 专属性实验23
• 2.2.4 标准液配制23-24
• 2.2.5 血浆标准曲线配制24
• 2.2.6 生物样品处理24
• 2.2.7 准确度与精密度考察24
• 2.2.8 回收率考察24
• 2.2.9 基质效应考察24-25
• 2.3 实验结果25-28
• 2.3.1 专属性实验25-26
• 2.3.2 标准曲线配制26
• 2.3.3 准确度与精密度考察26-27
• 2.3.4 提取回收率考察27-28
• 2.3.5 基质效应考察28
• 2.4 讨论28-29
• 第三章 小鼠口服和静脉注射芍药内酯苷的体内药代动力学研究29-40
• 3.1 材料29
• 3.1.1 药品和试剂29
• 3.1.2 实验仪器29
• 3.1.3 实验动物29
• 3.2 实验方法29-31
• 3.2.1 色谱、质谱方法29
• 3.2.2 小鼠口服芍药内酯苷后血浆药代动力学特征29-30
• 3.2.3 小鼠静脉注射芍药内酯苷后血浆药代动力学特征30
• 3.2.4 小鼠口服芍药内酯苷后体内主要脏器组织分布30
• 3.2.5 小鼠口服芍药内酯苷后尿液和粪便排泄30-31
• 3.3 实验结果31-38
• 3.3.1 小鼠单次口服芍药内酯苷后血浆药代动力学特征31-35
• 3.3.2 小鼠单次静脉注射芍药内酯苷后血浆药代动力学特征35-36
• 3.3.3 小鼠口服芍药内酯苷后体内主要脏器组织分布36-38
• 3.3.4 小鼠口服芍药内酯苷后尿液和粪便排泄38
• 3.4 讨论38-40
• 第四章 Beagle犬口服和静脉注射芍药内酯苷的体内药代动力学研究40-52
• 4.1 材料40
• 4.1.1 药品和试剂40
• 4.1.2 实验仪器40
• 4.1.3 实验动物40
• 4.2 实验方法40-41
• 4.2.1 色谱、质谱方法40
• 4.2.2 Beagle犬口服芍药内酯苷后血浆药代动力学特征40-41
• 4.2.3 Beagle犬静脉注射芍药内酯苷后血浆药代动力学特征41
• 4.2.4 Beagle犬多剂量口服芍药内酯苷后血浆药代动力学特征41
• 4.3 实验结果41-50
• 4.3.1 Beagle犬口服芍药内酯苷后血浆药代动力学特征41-46
• 4.3.2 Beagle犬静脉注射芍药内酯苷后血浆药代动力学特征46-48
• 4.3.3 Beagle犬多次口服芍药内酯苷后血浆药代动力学特征48-50
• 4.4 讨论50-52
• 第五章 芍药内酯苷对药物代谢酶的诱导、抑制作用研究52-69
• 5.1 材料52
• 5.1.1 药品和试剂52
• 5.1.2 实验仪器52
• 5.2 实验方法52-56
• 5.2.1 芍药内酯苷体外代谢稳定性研究52-53
• 5.2.2 芍药内酯苷对细胞色素P450酶抑制作用研究53-54
• 5.2.3 芍药内酯苷对人原代肝细胞CYP1A2、CYP2B6、CYP3A4的诱导作用研究54-56
• 5.2.4 数据分析56
• 5.3 实验结果56-68
• 5.3.1 芍药内酯苷体外代谢稳定性研究56-57
• 5.3.2 芍药内酯苷体对人肝微粒体主要CYP450酶的抑制作用研究57-60
• 5.3.3 芍药内酯苷对人原代肝细胞CYP1A2、CYP2B6、CYP3A4的诱导作用研究60-68
• 5.4 讨论68-69
• 第六章 Caco-2细胞模型研究芍药内酯苷的吸收机制69-73
• 6.1 材料69
• 6.1.1 药品和试剂69
• 6.1.2 实验仪器69
• 6.2 实验方法69-71
• 6.2.1 Caco-2细胞模型研究芍药内酯苷的吸收机制操作方法69-70
• 6.2.2 数据处理70-71
• 6.3 实验结果71-72
• 6.4 讨论72-73
• 结语73-74
• 参考文献74-77
• 论著 GC-MS联用法分析不同产地白芍和赤芍挥发油成分77-93
• 攻读学位期间取得的研究成果93-94
• 致谢94

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本文编号：590912