肠易激综合征患者免疫功能与肠道菌群变化的相关性研究

发布时间：2017-09-21 09:00

  本文关键词：肠易激综合征患者免疫功能与肠道菌群变化的相关性研究

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【摘要】：研究背景:肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)是一种胃肠道功能紊乱性疾病,以长期的腹痛、腹胀且伴随着排便习惯改变为主要病征,并在排除胃肠道器质性病变后才能诊断。IBS也是全球人群患病率较高的疾病,并呈现逐年增加的趋势。由于该病病因目前仍未明确,缺乏客观形象的形态学改变和相关生化指标的异常改变,就使得它的诊断与治疗面临着些许困难。据统计,在西方国家IBS的患病率高达10%-20%,在我国也有10%的人群因为IBS带来的影响而降低了生活质量。据统计,IBS在中青年的发病率要高于老年人,而女性、男性患病人数的比例为2:1。IBS的症状复杂且多变,会长期反复发作,给生活带来的影响越发引起了人们的广泛关注,很多临床及实验研究主要围绕IBS的病因而展开,并根据其发病机制来制定有效的治疗方案。目前IBS病因仍不明确,据报道,可能与肠道动力紊乱、精神心理因素、内脏感觉异常、脑-肠轴、以及遗传等因素有关。近年来发现IBS的发病与免疫功能的变化和肠道菌群的变化有关,但是具体关联所见的报道较少。本研究的目的就是探讨IBS患者免疫功能与肠道菌群的相关性。目的:1.通过对比IBS和健康人群的白细胞总数、淋巴细胞百分比、单核细胞百分比、粒细胞百分比的差异性,探讨IBS患者免疫细胞指标的特异性变化。2.通过对比分析IBS患者与健康人群肠道菌群特性和多样性变化,来讨论肠道菌群失调对IBS的可能影响。方法:1.病例选择:按照罗马Ⅲ诊断标准确定IBS病例,并收集IBS患者的粪便样本,同时采集健康体检者的粪便样本作为对照。ibs组来自大连市大连大学附属中山医院2014年4月—2014年9月期间在消化科病房住院的ibs患者24例,年龄在21-70岁不等。其中男性标本10例,女性14例。2.粪便样本采集:所有标本均取自被选ibs患者在清晨自然排出的新鲜无污染粪便,用一次性器具挑取5g左右,置入环氧乙烷消毒过的大便标本盒内,并立即密封标本放置于-80℃中冷冻。采集过程时间严格控制在30min以内,为肠道菌群分析做好准备。3.血液样本采集:采用真空采血法,在清晨空腹的状态下抽取ibs患者的静脉血2ml并注入edta-k2的抗凝管中(采血前一天应与患者说明晚上十点后至次日清晨采血前需要禁食水,且采血前不要做剧烈运动,避免外界刺激),轻轻混匀后立即送往检验科进行血常规检测(检测白细胞总数、淋巴细胞百分比、单核细胞百分比、粒细胞百分比),机器型号为sysmexxe-2100全自动血液分析仪。4.检测ibs患者的白细胞总数、淋巴细胞百分比、单核细胞百分比、粒细胞百分比值,并与健康人群参考值做对比。5.利用pcr-dgge指纹图谱技术分析ibs患者和健康人群肠道菌群间的差异。6.统计学方法:利用spss19.0、quantityone4.6.2、imagelab、canoco4.5等软件进行。结果:1.ibs患者的免疫学细胞的变化ibs患者免疫功能与健康人群相比,ibs患者的白细胞总数(wbc)、淋巴细胞百分比(ly%)、单核细胞百分比(mo%)明显降低(p0.05),但粒细胞百分比(neu%)没有显著差异。2.ibs患者肠道菌群的变化ibs患者肠道菌群与健康人群相比,ibs患者的粪便标本条带数为19.00±2.83,健康对照组条带数为26.79±3.46,从电泳图谱条带数看,ibs患者明显低于健康对照组,具有统计学意义(p0.01)。从主成分分析结果可以看出,ibs患者的菌群与健康对照组形成较为明显的两个聚类群。结论:1.与健康人群相比,IBS患者的免疫细胞数减少,白细胞总数、淋巴细胞百分比、单核细胞百分比都有显著差异。2.IBS患者存在肠道菌群失调,且肠道菌群的生物多样性减低。3.IBS患者肠道菌群多样性的减少的同时,患者的免疫细胞水平也降低,可能是由于菌群影响了其免疫功能而导致IBS的发生。
【关键词】：肠易激综合征 细胞免疫 肠道菌群
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R574.4
【目录】：

• 摘要7-10
• Abstract10-13
• 前言13-14
• 材料和方法14-21
• 一、材料14-16
• 1.标本采集14-15
• 2.主要试剂15
• 3 主要实验仪器15-16
• 4.分析软件16
• 二、方法16-21
• 1.病例选择16-18
• 2. 主要溶液配置18
• 3.粪便基因组的DNA提取18-19
• 4. PCR-DGGE分析19-21
• 结果21-26
• 1. IBS患者的免疫学细胞的变化21-23
• 2. DGGE图谱分析23-25
• 3. 主成分分析(PCA)25-26
• 讨论26-28
• 结论28-29
• 参考文献29-31
• 综述31-39
• 参考文献37-39
• 致谢39-40

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