FSH调控猪卵泡颗粒细胞自噬的分子机制研究

发布时间：2017-12-12 07:31

  本文关键词：FSH调控猪卵泡颗粒细胞自噬的分子机制研究

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【摘要】：本实验旨在研究促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)对猪卵泡颗粒细胞自噬活性的影响及其调控通路。研究结果表明：FSH可以显著增强体外培养猪卵泡中自噬标志蛋白LC3-Ⅱ的表达,并且上调颗粒细胞内胞内自噬体数量,通过自噬流阻断研究显示FSH可以增强卵泡的自噬流水平；结合上述结果我们认为FSH可以增强体外培养猪卵泡颗粒细胞的自噬活性。进一步研究发现,FSH可以增强猪卵泡颗粒细胞中自噬关键基因beclin-1 mRNA和蛋白的表达；在添加PI3K/AKT通路特异抑制剂LY294002或SAPK/JNK通路特异抑制剂SP600125预处理颗粒细胞后,可以抑制FSH诱导的beclin-1上调。同时我们的研究发现FSH可以引起SAPK/JNK通路下游重要转录因子c-Jun的磷酸化,使用LY294002或SP600125处理可以抑制c-Jun的磷酸化。通过核质分离实验和染色质免疫共沉淀研究证明,磷酸化的c-Jun可以结合在beclin-1的启动子上,而FSH可以促进c-Jun与beclin-1启动子的结合。通过RNAi敲降颗粒细胞中c-Jun可以抑制FSH诱导的beclin-1增加,说明FSH可能通过PI3K/JNK/c-Jun通路调控颗粒细胞中beclin-1表达。此外,我们研究结果还发现,FSH可以增加体外培养的猪颗粒细胞的孕酮分泌,通过添加自噬抑制剂氯喹以及SP600125可以抑制FSH诱导的孕酮分泌,且不影响颗粒细胞中孕激素合成的关键基因StAR和P450scc的mRNA的表达。我们的研究结果表明在猪颗粒细胞中,FSH不但可以促进孕激素合成的关键基因StAR和P450scc的mRNA的表达,同时还可以通过增强颗粒细胞的自噬活性促进颗粒细胞孕酮的分泌。核转录因子κB (NF-κB)家族在哺乳动物细胞内的多种生命进程如细胞的增殖与分化,凋亡与炎症中发挥重要作用。然而NF-κB在卵泡发育中的作用仍不是很清楚。本研究发现,FSH处理可以上调猪原代颗粒细胞中的NF-κB抑制蛋白(IκB)的表达,并使NF-κB家族中RelA/p65亚单位的胞质定位增加,说明FSH可以抑制颗粒细胞中NF-κB通路的激活。为研究NF-κB通路抑制对卵泡发育的影响,我们使用特异性NF-κB信号通路的抑制剂,PDTC (pyrrolidine dithiocarbamate)对颗粒细胞进行处理。研究结果显示,FSH和PDTC的处理都可以引起颗粒细胞中JNK通路的激活以及自噬活性的增加。通过RNAi敲降颗粒细胞中Re1A (p65)可以抑制FSH诱导的JNK通路的激活以及自噬标记蛋白beclin-1和LC3-Ⅱ的表达。同时我们的研究还发现FSH、PDTC都参与颗粒细胞内孕酮的分泌,使用自噬抑制剂氯喹可以抑制FSH和PDTC诱导的孕酮分泌。我们的研究结果表明在颗粒细胞内抑制NF-κB通路可以引起JNK通路的激活,增强颗粒细胞的自噬活性,进而参与颗粒细胞内类固醇激素代谢的调控。我们的研究将为进一步揭示哺乳动物卵泡发育过程中自噬的调节机制与功能提供参考。
【学位授予单位】：中国农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S828

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本文编号：1281694