猪卵母细胞成熟过程中Perilipins和PPARγ作用机制的研究

发布时间：2017-12-20 06:29

  本文关键词：猪卵母细胞成熟过程中Perilipins和PPARγ作用机制的研究　出处：《中国农业大学》2015年博士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：猪卵母细胞和胚胎细胞内以脂滴的形式储存大量的内源性脂质,这些脂质为卵母细胞及早期胚胎发育供能。本研究旨在探讨猪卵母细胞成熟过程中脂滴相关蛋白(perilipin1) PLIN1和PLIN2(perilipin2)的表达定位,及上游转录因子过氧化物酶增殖活化受体(Peroxisome proliferator-activated receptor gamma, PPARγ)舌化对卵母细胞发育的影响。实验一采用实时定量PCR、 Western blot免疫荧光染色检测猪卵母细胞成熟前后PLIN1和PLIN2的表达和定位。结果显示,猪卵母细胞成熟前后不表达PLIN1,但PLIN2mRNA稳定存在,且PLIN2蛋白在MII卵母细胞内的表达量显著低于GV期卵母细胞(p0.05)。PLIN2蛋白与BODIPY493/503染色的脂滴呈现完全共定位的现象。这些结果证明PLIN2是猪卵母细胞内的一种主要的脂滴相关蛋白。另外,实验进一步检测猪卵母细胞成熟前后PPARymRNA的表达,及PPARy激活剂曲格列酮(Troglitazone, TZD)对PLIN2mRNA表达的影响,结果表明：猪MII卵母细胞内PPARymRNA的表达显著升高(p0.01),且TZD可显著下调猪MII卵母细胞内的PLIN2mRNA水平(p0.05)。实验二研究PPARy活化对猪卵母细胞发育的影响及其调节途径。将不同浓度的TZD添加至猪卵母细胞体外成熟体系中,结果显示添加5μmol/L TZD可显著提高猪卵母细胞的核成熟率(59.4%+1.7vs.48.8%+4.3)(P0.05)。进一步检测在成熟不同阶段(前22h,后22h及全程44h)添加5μmol/L TZD对核成熟的影响,结果表明全程44h添加TZD可显著提高卵母细胞的核成熟率(62.06%+3.34vs.50.59%+1.21)(P0.05)。之后,检测添加5μmol/L TZD对卵丘扩展直径及卵母细胞发育能力的影响。结果表明,TZD添加组的卵丘扩展直径(371.64μm+12.60)和孤雌激活胚的卵裂率(72.3%±0.08)及囊胚率(35.7%+0.00)与对照组均无显著性差异(P0.05)。最后,检测FSH和LH是否参与调节TZD的促成熟效应。结果表明,只有在FSH和LH存在的条件下,TZD可显著提高卵母细胞的核成熟率(65.8%+2.78vs.2.57%+1.05)(P0.05)。 实验三采用Cryotop法对猪GV期卵丘卵母细胞复合体(COCs)进行玻璃化冷冻,检测冷冻对卵母细胞发育过程中cAMP水平的影响。结果显示,冷冻组COCs体外培养至44h后,卵母细胞的存活率(82%+0.03)、极体排出率(36%+0.01)、激活后的卵裂率(41%+0.01)和囊胚率(5%土0.01)都显著低于新鲜组(P0.05)。另外,新鲜组COCs的卵母细胞内cAMP水平变化正常：即体外发育6h时卵母细胞内cAMP水平出现峰值,24h显著下降并维持至44h；冷冻组COCs的卵母细胞内存在cAMP积累的现象,且体外培养24时卵母细胞内cAMP出现峰值,44h时又显著下降。 综上所述,PLIN2是猪卵母细胞内一种关键的脂滴相关蛋白,参与卵母细胞成熟过程中的脂滴动态重组。FSH和LH协同促进TZD的促成熟效应。冷冻COCs引起卵母细胞内cAMP积累是导致卵母细胞发育能力降低的原因之一
【学位授予单位】：中国农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S814

【参考文献】

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1 乔利敏;李向臣;乔富强;姚华;张文秀;关伟军;马月辉;;利用亮甲酚蓝染色法预测牛卵母细胞发育潜能的研究[J];畜牧兽医学报;2011年09期

2 ;Translocation of classical PKC and cortical granule exocytosis of human oocyte in germinal vesicle and metaphase Ⅱ stage[J];Acta Pharmacologica Sinica;2006年10期

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本文编号：1311085