微囊化益生菌的体外特性及动物应用效果评价

发布时间：2018-02-16 11:15

本文关键词： 微胶囊 Saccharomyces boulardii Enterococcus faecium 肉鸡小鼠　出处：《东北农业大学》2016年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：本研究采用乳化法发酵前包被布拉迪酵母菌(Saccharomyces boulardii)和粪肠球菌(Enterococcus faecium),利用500 L发酵罐中试生产微囊化益生菌,评价微囊化益生菌对体外不良环境的抵抗能力以及在动物体内的应用效果,为微囊化益生菌应用于畜牧业生产提供理论依据及应用参数。本研究共分为以下4个部分,具体如下:试验一、微囊化益生菌的制备及体外特性评价采用乳化法制备S.boulardii和E.faecalis微胶囊,通过生物显微镜和扫描电子显微镜观察微胶囊形态结构,激光粒度仪检测微胶囊的粒径分布;以菌粉为对照,在常温贮存(5个月)、体外模拟胃肠液及高温(110℃和130℃)的条件下,评价微囊化益生菌对不良环境的抵抗能力。试验结果显示,益生菌微胶囊大小均匀,成球性良好,菌体密度较大。S.boulardii和E.faecalis微胶囊的平均粒径分别是549μm和590μm。与菌粉组相比,110℃和130℃高温下,微囊化过程显著提高益生菌的存活率,尤其是E.faecalis的耐受性,差异显著(P0.05);p H 3.0,胃蛋白酶处理180 min后,S.boulardii和E.faecalis微胶囊存活率分别提高57.76%和46.73%(P0.05);pH 6.8,胆盐0.3%,胰蛋白酶处理180 min后,S.boulardii和E.faecalis微胶囊的存活率分别提高26.89%和19.27%(P0.05);常温储存第5个月,S.boulardii和E.faecalis微胶囊的存活率分别提高34.63%和19.46%(P0.05)。说明益生菌经过微囊化后,可显著提高其在高温、胃肠液和常温贮存条件下的存活率。试验二、微囊化S.boulardii对肉鸡生产性能、免疫功能及盲肠微生物菌群的影响试验选取1日龄健康爱拔益加(AA)肉仔鸡公雏700只,随机分为7个处理组,每个处理组5个重复,每重复20只。各处理组分别为:基础饲粮组(CON),抗生素组(ANT),低剂量菌粉组(P1),高剂量菌粉组(P2),空胶囊组(CAP),低剂量微胶囊组(CAPP1),高剂量微胶囊组(CAPP2)。试验肉鸡在第21 d和42 d宰杀,取样并进行相关指标分析。数据显示:(1)微囊化S.boulardii组相对于菌粉组平均日增重有所提高,料重比有所降低,其中在试验前期CAPP1组平均日增重显著高于P2组(P0.05)(2)与菌粉组相比,CAPP2组21 d的过氧化氢酶(CAT)含量显著提高(P0.05)。(3)与P1组相比,21 d时,CAPP1组血清抗原决定簇(CD4)含量显著升高(P0.05),肿瘤坏死因子-?(TNF-?)含量显著降低(P0.05);42 d时,CAPP1组和CAPP2组肉鸡血清白细胞介素-6(IL-6)含量显著升高(P0.05)。(4)21 d时,与P1组相比,CAPP1组空肠绒毛高度显著升高(P0.05),CAPP2组十二指肠绒毛高度/隐窝深度(VH/CD)和空肠绒毛高度显著升高(P0.05),42 d时,CAPP1组十二指肠VH/CD显著高于P2组(P0.05)。CAPP1组和CAPP2组空肠与回肠的绒毛高度显著高于菌粉组(P0.05)。(5)42 d时,CAPP1组和CAPP2组香浓指数(shannon)显著高于CON组(P0.05)。21 d时,ANT组拟杆菌门(Bacteroidetes)相对比例显著高于P1组、CAP组以及CAPP2组,42 d时CAPP1组乳酸菌属(Lactobacillus)相对比例显著高于其他各组(P0.05)。试验三、微囊化E.faecalis对肉鸡生产性能、免疫功能及盲肠微生物菌群的影响试验选取1日龄健康爱拔益加(AA)肉仔鸡公雏600只,随机分为6个处理组,每个处理组5个重复,每重复20只。各处理组分别为:基础饲粮组(CON),抗生素组(ANT),低剂量菌粉组(P1),高剂量菌粉组(P2),低剂量微囊化E.faecalis组(CAPP1),高剂量微囊化E.faecalis组(CAPP2)。试验肉鸡在第21 d和42 d宰杀,取样并进行相关指标分析。数据显示:(1)试验前期,微囊化E.faecalis组平均日增重显著高于P1组(P0.05),CAPP2组的料重比显著低于P1组(P0.05)。(2)与菌粉组相比,CAPP2组21 d的总抗氧化能力(T-AOC)显著升高(P0.05),21 d与42 d的丙二醛(MDA)含量显著降低(P0.05)。(3)21 d时,CAPP1组和CAPP2组TNF-?含量显著低于P2组(P0.05)。42 d时,CAPP1组和CAPP2组白细胞介素2(IL-2)含量显著高于P1组和P2组(P0.05),CAPP1组IL-6含量显著高于P1组(P0.05)。(4)21 d时,CAPP2组十二指肠VH/CD显著高于P1和P2组(P0.05),CAPP1组和CAPP2组空肠VH/CD显著高于P1组(P0.05)。42 d,CAPP1组和CAPP2组十二指肠绒毛高度显著高于其他各组(P0.05),CAPP1组和CAPP2组空肠绒毛高度显著高于P1组(P0.05),CAPP1组和CAPP2组回肠VH/CD显著高于其他各组(P0.05)。(5)42 d时,CAPP1组和CAPP2组厚壁菌门(Firmicutes)和Lactobacillus的相对比例显著高于其他各组(P0.05)。综合试验二和试验三的结果,微囊化S.boulardii和E.faecalis可显著改善肉鸡生产性能、抗氧化性能、免疫功能、肠道黏膜形态以及盲肠微生物菌群结构,提示乳化法发酵前包被制备的S.boulardii和E.faecalis微胶囊相比未包被的菌粉具有更好的益生作用。试验四、微囊化S.boulardii与E.faecalis对小鼠急性溃疡性结肠炎的影响试验采用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠结肠炎模型,72只雄性C57BL/6小鼠,随机分为6个处理组,每个处理组12只小鼠,各处理组分别为对照组、DSS组、E.faecalis菌粉组、微囊化E.faecalis组、S.boulardii菌粉组、微囊化S.boulardii组。预试期7 d,正式试验期7 d。试验期间每日观察小鼠进食、饮水、活动等一般情况,试验第7天,取血清、结肠肠段和结肠黏膜样品进行相关指标的分析检测。试验结果显示:与对照组相比,DSS组小鼠毛色干枯,精神萎靡,活动量明显减少,体重下降趋势较明显;结肠明显缩短,组织病理学评分和MPO活性显著升高(P0.05)。经过E.faecalis和S.boulardii灌胃后,小鼠的一般情况和结肠组织病理状态均有所改善;小鼠血清IL-6与TNF-α含量显著低于DSS组(P0.05);S.boulardii菌粉组和微囊化S.boulardii组结肠紧密连接蛋白(Occludin与Claudin-1)的表达量显著高于DSS组(P0.05)。综上,E.faecalis和S.boulardii可以缓解UC模型小鼠结肠炎症病变,其机制与E.faecalis和S.boulardii可以降低血清中细胞因子IL-6与TNF-α含量,升高肠道黏膜紧密连接蛋白(Occludin与Claudin-1)的蛋白表达量密切相关,经过微囊化后的E.faecalis和S.boulardii表现出更好的缓解小鼠急性溃疡性结肠炎病症效果。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S816

【参考文献】