Lnc-SEMT促进绵羊肌肉分化生成的功能研究

发布时间：2018-03-22 18:08

  本文选题：绵羊　切入点：胎儿　出处：《中国农业大学》2016年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：LncRNA是一类长度大于200个nt且不表现出蛋白质编码潜能的RNAs。参与了X染色体沉默,基因组印记以及染色质修饰,转录激活,转录干扰,核内运输等多种重要的调控过程,涉及到表观遗传调控、转录调控及转录后调控等多个层面。最新报道LncRNA分子可以调节人和小鼠的肌肉功能,但LncRNA对肉用家畜肌肉分化发育调控的研究尚无报道。本研究通过高通量测序的手段筛选到一个的可以促进绵羊肌肉细胞分化,促进成肌生成的LncRNA分子(命名为Lnc-SEMT),试验分析发现它对骨髂肌发育具有重要调控作用.该分子的研究为阐明动物肌细胞的增殖、分化的分子机制具有重要意义,并可为肉羊分子辅助育种和开发新型的促生长制剂提供科学依据和技术支持。主要研究结果如下：1.通过对胚胎期90口和120日龄绵羊背最长肌样品进行高通量测序,共计得到1114个lncRNA,其中466个lncRNA差异表达,而466个差异表达的lncRNA中,其中157个lncRNA上调,309个lncRNA下调。2.通过对测序得到的1114个lncRNA进行芯片验证,发现有867个预测的lncRNA存在,其中有119个lncRNA的表达上调,对这119个lncRNA进行定量筛选后,得到了一个在骨骼肌组织中特异性高表达的上调LncRNA(命名为Lnc-SEMT)。3.通过检测绵羊不同生长时期的Lnc-SEMT表达水平发现,在胚胎期120日龄时,其表达量最高,出生后逐渐降低,成年后表达水平变化不大。4.通过检测绵羊成肌细胞生长分化过程中的lncRNA表达量变化,在成肌细胞分化0-5天内,随着成肌细胞的生长分化,MYOG和MYOD基因表达水平也随着升高。5.构建了Lnc-SEMT的高表达和干扰载体,分别转染到绵羊成肌细胞,通过DAPI和MyHC试验分析,结果表明随着成肌细胞分化过程中Lnc-SEMT的过表达和干扰,MYOG, MYOD等基因随着Lnc-SEMT的变化而变化。6.通过显微注射的手段,得到了5只转Lnc-SEMT绵羊。转基因突变绵羊的Lnc-SEMT表达水平是野生型绵羊的3.3倍。7.通过对转Lnc-SEM T绵羊出生后的体重进行测量,发现突变羊在3月龄,6月龄和9月龄的体重都显著高于对照野生组。另外屠宰试验中突变羊的胴体重也显著高于对照野生组。8.通过对转Lnc-SEMT绵羊进行HE染色和免疫荧光染色,发现突变羊的肌纤维的横截面积显著高于对照组,另外,突变羊的30-45μm直径的肌纤维显著高于对照组,其他直径的肌纤维差异不明显。9.通过应用软件,预测到了Lnc-SEMT 与 miR-125 b的潜在结合位点。10.对Lnc-SEMT 于 miR-125b的结合位点进行突变,并进行体外转染试验,发现miR-125b确实存在与L nc-SEMT潜在的结合位点,同时Lnc-SEMT与miR-125b竞争性的结合IGF-2,以实现促进成肌细胞分化和成肌生成的作用。11.通过对转Lnc-SEMT绵羊的血清进行检测,发现转Lnc-SEMT绵羊血液中的IGF-2表达量显著高于对照野生组。
[Abstract]:LncRNA is a kind of length greater than 200 nt and does not show the protein encoding potential RNAs. in chromosome X silencing, genomic imprinting and chromatin modification, transcriptional activation, transcription regulation of nuclear interference, transportation and other important, involved in epigenetic regulation, transcriptional regulation and post transcriptional regulation of multiple the latest reported level. LncRNA molecules can regulate human and mouse muscle function, but there is no report on LncRNA development regulation of meat animal muscle differentiation. This study screened a can promote sheep muscle cell differentiation by means of high-throughput sequencing, promote LncRNA molecules into muscle formation (named Lnc-SEMT), test the analysis found that it has an important role on the development of skeletal muscle. The molecular research to elucidate animal muscle cell proliferation plays an important role in the molecular mechanism of differentiation, and for molecular assisted sheep 鑲茬�嶅拰寮�鍙戞柊鍨嬬殑淇冪敓闀垮埗鍓傛彁渚涚�戝�︿緷鎹�鍜屾姡�

本文编号：1649787