CCR2自分泌在胚胎附植期猪子宫内膜的表达分布和功能研究

发布时间：2016-11-25 20:22

  本文关键词：CCL2-CCR2自分泌在胚胎附植期猪子宫内膜的表达分布和功能研究，，由笔耕文化传播整理发布。

《中国农业大学》 2015年

CCL2-CCR2自分泌在胚胎附植期猪子宫内膜的表达分布和功能研究

樊自尧  

【摘要】：产仔数是猪的重要经济性状,胚胎附植期分子机理研究对猪产仔数的提高具有重要意义。CCL2(CC chemokine ligand2, CC趋化因子配体2)被报道表达在人、羊等附植阶段的子宫内膜,但调节机制和生物学功能还不清楚。本论文针对CCL2和其受体CCR2(CC chemokine receptor2)CC趋化因子配体2)在胚胎附植期猪子宫内膜的表达调控和其影响猪子宫内膜的胚胎附植的生物学功能进行了研究。 本研究首先对CCL2和CCR2在猪子宫内膜的表达进行定位,结果发现CCL2和CCR2同时表达在猪子宫内膜腔上皮细胞。通过对妊娠第13天、第18天和第24天,以及发情周期第13天和第18天的猪子宫内膜进行实验条件相同的免疫组化来检测CCL2和CCR2的表达量的变化。结果表明,CCL2和CCR2的表达量发情周期高于胚胎附植期；在发情周期第13天子宫内膜腔上皮表达的CCL2和CCR2高于第18天的子宫内膜腔上皮；CCL2和CCR2在所有附植点腔上皮表达低于附植点间；附植点和附植点间的CCR2表达量在在妊娠第13天开始表达量升高,妊娠第18天达到峰值,之后开始下降;附植点和附植点间的CCL2的表达量随妊娠进行而逐渐下降,说明CCL2和CCR2的变化可能与胚胎附植期的猪子宫内膜调控机制有关。 实验建立了猪原代子宫内膜腔上皮细胞的培养方法,获得了原代猪子宫内膜腔上皮细胞。为了研究CCL2和CCR2之间是否存在自分泌现象,对细胞分别添加猪CCL2重组蛋白、CCR2阻断剂(RS102895)和RS102895+CCL2重组蛋白等处理,以及对照组。结果表明,CCL2可以促进细胞表达CCR2,添加RS102895或RS102895+CCL2重组蛋白的细胞,会剧烈上调CCR2的表达；各试验组细胞表达CCL2mRNA的变化没有显著变化。说明CCL2和CCR2之间存在正调控方式的自分泌,CCR2被RS102895阻断后,CCR2出现剧烈的上调。实验检测了孕酮对猪子宫内膜腔上皮细胞表达CCL2和CCR2的影响。向原代猪子宫腔上皮细胞中添加孕酮,用Westernblotting检测CCL2和CCR2的表达量,发现孕酮可以促进CCL2和CCR2的表达；向卵巢切除的母猪注射孕酮,免疫组化结果显示,注射孕酮的母猪的子宫内膜腔上皮细胞CCL2和CCR2的表达量显著高于对照组。说明孕酮对猪子宫内膜腔上皮表达CCL2和CCR2具有促进作用。 为了挖掘CCL2-CCR2信号在猪子宫内膜腔上皮细胞存在的自分泌现象的生物学意义,实验分别用CCL2的重组蛋白,抗CCL2中和抗体与对照处理原代猪子宫内膜腔上皮细胞,24小时后提取mRNA进行转录组测序,实验组分别与对照组进行比较,利用DE-Seq的方法并限定FC大于2或小于0.5,FDR小于0.01和RPKM大于10获得差异基因,对照组和CCL2蛋白组没有获得差异基因,对照组和CCL2中和抗体组获得48个差异基因,其中包括VEGFA、CEBPB、MIF、 MMP15、CLDN3等被报道与胚胎附植相关的11个基因。检测了CCL2对细胞增殖的影响,CCL2中和抗体添加到细胞中,处理不同时间后CCK8检测细胞增殖发现高浓度CCL2可以抑制细胞增殖,但CCL2重组蛋白添加后细胞增殖情况与对照组没有显著差异。实验通过血清饥饿猪子宫内膜腔上皮细胞模型检测了CCL2-CCR2对饥饿导致的细胞自噬作用,结果显示CCL2促进自噬,防止细胞死亡。综上,合适浓度的CCL2-CCR2可以维持猪子宫内膜腔上皮细胞的正常存活,对胚胎附植的顺利进行具有重要的意义。

【关键词】：
【学位授予单位】：中国农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S828
【目录】：

下载全文 更多同类文献

CAJ全文下载

(如何获取全文？ 欢迎：购买知网充值卡、在线充值、在线咨询)

CAJViewer阅读器支持CAJ、PDF文件格式

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 Fuller W Bazer;Gwonhwa Song;Jinyoung Kim;Kathrin A Dunlap;Michael Carey Satterfield;Gregory A Johnson;Robert C Burghardt;;Uterine biology in pigs and sheep[J];Journal of Animal Science and Biotechnology;2012年03期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李丽静;刘佳;李玉梅;王楚盈;王晶华;李秋明;;参附汤血中移行成分对缺氧复氧心肌细胞凋亡和自噬的影响[J];中医药临床杂志;2012年08期

2 伍国耀;;怀孕母猪的精氨酸营养和繁殖性能[J];饲料工业;2012年22期

3 齐利枝;生冉;闫素梅;赵艳丽;;乙酸浓度对奶牛乳腺上皮细胞甘油三酯含量及瘦素和过氧化物酶增殖物激活受体γ基因表达量的影响[J];动物营养学报;2013年07期

4 王秀美;侯先志;敖长金;高民;考桂兰;高爱武;兰儒冰;塔娜;;三维模式下培养时间对奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白基因表达的影响[J];动物营养学报;2013年07期

5 张冬梅;侯先志;杨金丽;高爱武;王海荣;考桂兰;;饲粮能氮限饲与补偿对蒙古羔羊肝脏重量、肝细胞增殖和增肥及生长激素受体、类胰岛素生长因子基因表达量的影响[J];动物营养学报;2013年07期

6 倪娟;李珍;薛京伦;汪旭;;表没食子儿茶素没食子酸酯对人成淋巴细胞株hMLH1和hMSH2 mRNA表达的影响[J];癌变·畸变·突变;2013年04期

7 郑旭青;代天星;林晓敏;熊浩;杨海弟;;KCNJ10通道蛋白在C57BL/6J小鼠耳蜗的年龄相关性表达及与听力关系[J];中国耳鼻咽喉头颈外科;2013年08期

8 文惠方;蒋春梅;张尚弟;车团结;黄超杰;赵峰;;宫腔脱落细胞中p53、ki-67、bcl-2、bax基因的表达及意义[J];中国妇产科临床杂志;2013年05期

9 孙敏敏;刘含亮;王红卫;孟晓;王纪亭;万文菊;;酵母铬对尼罗罗非鱼生长和糖代谢的影响[J];动物营养学报;2013年09期

10 朱铁锤;;NLRP3在马兜铃酸致肾损伤小鼠肾脏组织中的表达及其意义[J];吉林大学学报(医学版);2013年05期

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 史记;Vam3对香烟烟雾诱导肺上皮细胞自噬的影响及作用机理研究[D];北京协和医学院;2012年

2 刘馨;小麦赤霉病菌麦角甾醇生物合成途径中关键基因的功能研究[D];浙江大学;2012年

3 黄昂;非小细胞肺癌患者CD14~+HLA-DR~(-/low)髓系抑制性细胞特点及与肺癌进展相关性研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2013年

4 高国栋;纳米二氧化钛暴露致小鼠生殖毒性及其基因表达的变化[D];苏州大学;2013年

5 唐晓龙;青藏高原两种沙蜥的代谢特征及其对环境的适应[D];兰州大学;2013年

6 徐云敏;家蚕内层卵壳蛋白及蚕卵致死突变体（l-e~m）突变机理研究[D];西南大学;2013年

7 黄星;凋亡抑制蛋白XIAP抑制自噬促进肿瘤形成的作用机制研究[D];中国科学技术大学;2013年

8 庄学伟;1、子痫前期胎盘syncytin-1甲基化状态的研究 2、Syncytin-1在非小细胞肺癌的初步研究[D];山东大学;2013年

9 王振波;LC3A在食管鳞癌中的放化疗敏感性预测作用[D];山东大学;2013年

10 赵一萍;蒙古马免疫相关基因表达研究及脾脏表达谱分析[D];内蒙古农业大学;2013年

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 邓艳幔;崔亚利;胡满;肖欢;;小鼠胚胎附植前后瘦素与脂肪细胞变化的相关性试验[J];中国兽医杂志;2010年02期

2 杨青,薛立群,刘斌,刘扬,袁安文;维生素E对附植前小鼠胚胎发育与一氧化氮生成的影响[J];湖南农业大学学报(自然科学版);2003年04期

3 王水莲,薛立群,刘进辉,袁安文,许道军;附植前后不同时期兔子宫蛋白质的特异性[J];湖南农业大学学报(自然科学版);2005年03期

4 王水莲,薛立群,贺建华,袁安文,唐红星,向建州;附植前后兔子宫和胚胎总蛋白含量的变化[J];湖南农业大学学报(自然科学版);2002年02期

5 王水莲,薛立群,陈小军;干扰素对附植前后哺乳动物妊娠识别与维持的作用[J];湖南农业大学学报(自然科学版);2005年04期

6 邓艳幔;崔亚利;胡满;;小鼠胚胎附植前后瘦素水平与胃瘦素长型受体相关性研究[J];河北农业大学学报;2010年01期

7 邓亮;张翔;韩国才;;马胚胎附植及其分子调控研究进展[J];中国畜牧兽医;2011年03期

8 姚宁;曾申明;;哺乳动物附植前胚胎的基因表达调控[J];中国畜牧杂志;2006年01期

9 廖海艳;;NO对小鼠早期胚胎发育和附植的影响[J];湖南农业科学;2009年04期

10 廖海艳;庄远红;;一氧化氮对小鼠胚胎附植期MMP-9表达的影响[J];湖南农业科学;2013年09期

中国重要会议论文全文数据库 前4条

1 余四九;巨响红;崔燕;;牦牛胚胎的附植模式及附植过程中的细胞凋亡[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十四次学术研讨会论文集[C];2006年

2 万鹏程;石国庆;周平;代蓉;刘守仁;曾申明;;绵羊妊娠识别与胚胎附植调控机制[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集（下册）[C];2010年

3 喻林华;薛立群;袁安文;许道军;向建洲;刘扬;;小鼠附植前胚胎发育过程中nNOS and iNOS mRNA的表达[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年

4 熊燊源;巩斌;万鹏程;石国庆;;ATF4基因在绵羊胚胎附植期子宫中的表达模式研究[A];中国畜牧兽医学会养羊学分会2014年全国养羊生产与学术研讨会议论文集[C];2014年

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 巨向红;牦牛胚胎附植过程中细胞凋亡及其通路的研究[D];甘肃农业大学;2006年

2 王红芳;瘦素在猪胚胎附植中的功能及其信号通路的研究[D];中国农业大学;2014年

3 樊自尧;CCL2-CCR2自分泌在胚胎附植期猪子宫内膜的表达分布和功能研究[D];中国农业大学;2015年

中国硕士学位论文全文数据库 前5条

1 胡春超;兔抗ES细胞免疫血清对附植前小鼠胚胎的作用[D];河北农业大学;2012年

2 戴建华;小鼠胚胎附植中NO对子宫内膜MMP-9 mRNA表达的影响[D];湖南农业大学;2007年

3 赵淑颖;水体氮磷浓度对附植藻类氮素来源的影响[D];南京信息工程大学;2014年

4 方威;猪Lhx8的结构及在组织和附植前胚胎中的表达分析[D];南京农业大学;2009年

5 廖海艳;一氧化氮对小鼠胚胎植入的影响[D];湖南农业大学;2008年

  本文关键词：CCL2-CCR2自分泌在胚胎附植期猪子宫内膜的表达分布和功能研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：192769