蜜蜂NF-Y基因家族响应热激胁迫的分子机制研究

发布时间：2021-01-14 16:51

　　蜜蜂作为重要的特种经济动物,不仅为人类提供丰富的蜂产品,而且在农作物授粉和维持生态系统平衡中发挥重要作用。然而,近年来,世界范围内的蜜蜂数量呈锐减趋势。研究表明,多种环境胁迫因子（包括热激胁迫）是造成蜜蜂数量减少的重要因素。热激胁迫影响蜜蜂的生长、发育和采集能力,危害较大。因此,研究蜜蜂的耐热性,改良和培育耐热蜜蜂新品种是保持蜂群健康发展的重要前提。但是,目前关于蜜蜂抵御热激胁迫的具体分子机制的研究较少。核因子Y（Nuclear Factor Y,NF-Y）是一类重要的转录因子,包括NF-YA、NF-YB和NF-YC三个亚基,在动物和植物中普遍存在,是近年来分子生物学研究领域的一个热点。动物NF-Y的研究主要集中在生长、发育、肿瘤、癌症和人类的一些其它疾病上。研究表明,植物NF-Y在热激胁迫反应中发挥重要作用。但是,动物NF-Y响应热激胁迫的分子机制仍然不清楚。本研究以中华蜜蜂（Apis cerana cerana）和意大利蜜蜂（Apis mellifera ligustica）为实验材料,首先通过转录组测序技术（RNA-sequencing,RNA-seq）筛选蜜蜂热激胁迫响应基因,... 

【文章来源】：山东农业大学山东省

【文章页数】：119 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

影响蜜蜂健康的生物胁迫因子分类(Evans and Schwarz,2011)

为了探明NF-YA、NF-YB和NF-YC之间是否存在互作关系,我们把蜜蜂的NF-YA、NF-YB和NF-YC的CDS序列不仅构建到pGBKT7表达载体上,还构建到pGADT7表达载体上,并做了酵母双杂交实验,结果如图3-11所示。从图3-11可以看出,不管把NF-YA、NF-YB和NF-YC构建到pGBKT7载体上,还是pGADT7载体上,我们发现,NF-YA和NF-YC互作,NF-YB与NF-YC互作。但是,NF-YA和NF-YB之间不存在互作关系。为了验证酵母双杂交的实验结果,我们把蜜蜂的NF-YA、NF-YB和NF-YC的CDS序列分别构建到Flag-NF-YA、Myc-NF-YB和HA-NF-YC真核表达载体上。并且,把这些真核表达载体转到果蝇的S2细胞做Co-IP实验,结果如图3-12所示。从图3-12A可以看出,只有当Flag-NF-YA和HA-NF-YC共转果蝇S2细胞时,NF-YA和NF-YC才能互作。同样,只有当Myc-NF-YB和HA-NF-YC共转果蝇S2细胞时,NF-YB和NF-YC才能互作(图3-12B)。这些结果进一步证明,NF-YA和NF-YC存在互作关系,NF-YB和NF-YC也存在互作关系。为了进一步证明NF-YB和NF-YC的互作关系,我们把Myc-NF-YB和HA-NF-YC共同转到果蝇的S2细胞,并做了免疫荧光实验,结果如图3-13所示。从图3-13可以看出,Myc-NF-YB和HA-NF-YC共同转到果蝇的S2细胞后,NF-YB和NF-YC在细胞质和细胞核中都有表达(图3-13)。前面我们证明了NF-YB是细胞质定位,NF-YC在细胞质和细胞核中都有定位(图3-7B),表明NF-YC通过与NF-YB互作,可以将在细胞质定位的NF-YB拉进细胞核,增加NF-YB在细胞核中的积累。

Co-IP实验被用来验证NF-YA、NF-YB和NF-YC的互作关系

【参考文献】：
期刊论文
[1]蜜蜂养殖现状与保护措施分析[J]. 陈建民.  世界热带农业信息. 2019(08)
[2]高温季节如何防止蜜蜂热伤衰落[J]. 王桂芝,娄德龙,王士强,车洪冉.  中国蜂业. 2019(08)
[3]我国中华蜜蜂饲养现状与建议[J]. 罗岳雄,陈黎红.  中国畜牧业. 2014(24)



本文编号：2977200