基于多反应监测质谱法对水稻功能蛋白绝对定量分析方法的研究

发布时间：2021-03-13 02:13

　　定量分析作物群体、组织和细胞以至亚细胞中蛋白质表达水平,对于揭示作物生长发育过程及其逆境胁迫响应的重要生理代谢与品质产量调控规律具有十分重要的理论意义。然而,传统的蛋白质定量技术方法普遍存在着蛋白分析灵敏度低、线性范围窄、基质干扰严重等诸多问题,这在很大程度上制约着从蛋白水平上对作物有关生理过程及其相关代谢机制的深入认识。本文基于多反应监测（MRM）质谱分析技术,结合蛋白酶解、净化和同位素标记等方法的应用,建立了适用于水稻功能蛋白的绝对定量方法,并成功实现了水稻籽粒中Glb33蛋白的绝对定量。主要研究结果如下:1、开发了16种典型水稻叶片蛋白的MRM质谱分析方法。以实际监测到的16种典型水稻蛋白为研究对象,对其酶解特征肽段进行选择和质谱条件优化。结果表明,以乙腈和0.1%（v/v）甲酸水溶液为流动相结合二元梯度洗脱,16种肽段在Poroshell 120 EC-C18色谱柱上获得良好的分离;在0.02⁵00 nM范围内,各肽段浓度与质谱响应值呈良好的线性关系,相关系数均大于0.99;仪器的检出限和定量限范围分别达到0.007⁰.5 nM和0.... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：119 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

蛋白质组学分析策略

基于质谱的蛋白质组学的技术路线(Kim et al.,2014)

蛋白质标记定量和非标记定量方法的技术路线(Anand et al.,2016)

【参考文献】：
期刊论文
[1]基于质谱的植物蛋白质组学研究方法[J]. 秦爱,郑晓敏,王坤.  植物科学学报. 2018(03)
[2]基于不同提取方法的水稻叶片蛋白质组的二维液相色谱分离及高分辨质谱分析[J]. 柴爽爽,马有宁,高欢欢,秦美玲,杨欢,张涵彤,何巧,林晓燕.  色谱. 2018(02)
[3]穗分化期外施24-表油菜素内酯（EBR）促进水稻源、库及籽粒灌浆的生理机制[J]. 李赞堂,王士银,姜雯宇,张帅,张少斌,徐江.  作物学报. 2018(04)
[4]iTRAQ技术及其在水稻蛋白质组学中的应用研究进展[J]. 陈凌华,程祖锌,许明,郑金贵.  中国农业科技导报. 2017(12)
[5]基于MALDI-TOF MS的串联富集策略在磷酸化蛋白组学中的应用[J]. 张传静,吴婷,任红鑫,张玲帆,杜一平.  分析测试学报. 2017(09)
[6]基于质谱的定量蛋白质组学技术发展现状[J]. 牟永莹,顾培明,马博,闫文秀,王道平,潘映红.  生物技术通报. 2017(09)
[7]蛋白质组学在水稻作物非生物胁迫研究中的应用[J]. 罗光宇,肖敏敏,刘爱玲,陈信波.  分子植物育种. 2018(02)
[8]大米过敏的研究进展[J]. 王一侠,陆路,徐姗姗,李国明,谷瑞增,蔡木易,鲁军.  食品安全质量检测学报. 2017(04)
[9]基于凝集素的唾液糖蛋白分离、分析及应用[J]. 孙凯博,尚志,孙妍,乔智,刘莎,樊柳荫,曹成喜,肖华.  色谱. 2016(12)
[10]基于UPLC-Q-TOF-MS技术的牛血清白蛋白诱导过敏反应的代谢组学研究[J]. 顾媛媛,张丹丹,冯程,王宇,陈大忠,王艳宏.  中国中药杂志. 2016(21)



本文编号：3079396