两种RNA测序文库制备方法的构建及其应用

发布时间：2021-04-18 00:50

　　【目的】疾病的预防与控制是确保人和动物健康的关键。病毒性传染病的记载已有数千年,严重危害人类和动物的生存与健康。分离和鉴定病毒以及确定病毒与疾病和宿主的关系是预防、诊断和治疗病毒性传染病的首要任务。下一代测序（NGS）技术以高通量、低成本和快速为主要特征,克服了传统技术方法的局限性并满足大规模测序任务的要求,是目前快速鉴定和发现未知病原体的最高效而准确的技术。RNA病毒的快速检测,对于诊断、治疗、控制和预防由RNA病毒引起人和动物的感染性疾病至关重要。近年来,下一代测序技术的发展,创新了RNA病毒检测方法。NGS可以通过一些随机模式揭示标本内大量的核酸序列（DNA或RNA）,并可同时检测各种RNA病毒。这些RNA病毒基因组的检测,不仅广泛应用于感染性疾病的诊断,还广泛应用于新型病毒的鉴定和宿主与病毒关系的研究。在使用NGS技术进行测序之前,RNA必须被逆转录,由于临床标本中的病毒RNA数量有限、容易发生降解,因此制备有效的测序文库仍然是基于NGS技术检测RNA病毒基因组的关键,但其方法仍然复杂,需要进一步优化。为了更好地鉴定RNA病毒,本研究尝试设计一种操作简便、测序结果更为理想、花费... 

【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省

【文章页数】：95 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

种文库构建方法技术线路图

图 1-1 3 种文库构建方法技术线路图Fig. 1-1 Technology roadmap of library construction bythree methods图1-2 文库制备方法1Fig.1-2 Method 1 for libraries preparation

2.2.2.2 使用方法 2 构建测序文库该方法是自行发明的，经过多次临床应用和修饰，总结出可靠的技术路线如图1-3。（1）反转录：①在无核酸酶的 0.2mL 的PCR 管中加入 2μL 无核酸酶的水、1μL 引物A15N6（5'- GTGTCTCCGACTCAGNNNNNN -3'）和 8μL 的 RNA，充分混匀后，瞬时离心，72℃变性 5min，立即置冰上 3min，瞬时离心。②在上述反应液中，加入下表（表 1-12）所示反转录混合液，共 20μL 反应体系。③在热循环仪中，设置反转录程序如下表（表 1-13）所示。图1-3 文库制备方法2Fig.1-3 Method 2 for libraries preparation表 1-12

【参考文献】：
期刊论文
[1]2011年德国肠出血性大肠杆菌O104:H4疫情流行病学调查及启示[J]. 黄熙,卢玲玲,邓小玲,黄琼,梁骏华,张永慧,杨杏芬.  中华流行病学杂志. 2012 (01)
[2]青海省2004年人间鼠疫分离株基因分型及流行病学意义[J]. 祁芝珍,戴二黑,周冬生,杨永海,于守鸿,戴瑞霞,赵海红,李敏,杨瑞馥.  中华流行病学杂志. 2006(04)



本文编号：3144468