ELOVL6对秦川肉牛前体脂肪细胞增殖和脂质代谢的作用研究
发布时间：2021-04-29 09:09
脂肪酸组成是影响牛肉营养、品质和风味的重要表型性状。如何平衡脂肪酸组成,提高肉质和营养水平,已成为育种工作新的研究方向。长连脂肪酸延伸酶6（ELOVL6）是调控体内脂肪酸组成总体平衡的关键基因,在脂肪酸延伸过程中发挥重要作用。已有研究报道过表达ELOVL6促进血管平滑肌细胞的增殖,但关于ELOVL6能否调控前体脂肪细胞的增殖尚无明确报道。ELOVL6参与脂质代谢,但关于ELOVL6参与脂质代谢的下游基因和信号通路尚不完全明确,ELOVL6上游调控因子有待进一步研究。基于此,本研究以西北农林科技大学选育的秦川牛肉用新品系（以下简称“秦川肉牛”）为研究对象,研究了ELOVL6在前体脂肪细胞增殖、凋亡和脂质代谢中的调控作用,旨在为秦川牛肉用遗传改良和分子育种提供理论依据。主要研究结果如下:1.ELOVL6基因在秦川肉牛不同组织中广泛表达,小肠中表达量最高,其次表达量较高的组织依次是网胃和脂肪,心脏、肌肉和脾脏中表达量较低。免疫荧光结果表明,ELOVL6蛋白主要在细胞质中表达。2.ELOVL6基因与牛前体脂肪细胞增殖呈正相关。干扰ELOVL6抑制了细胞增殖,阻滞了细胞由G2期进入M期。ELOV...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：126 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
主要符号对照表
第一章 文献综述
1.1 脂肪酸合成及分类
1.1.1 脂肪酸的合成
1.1.2 脂肪酸的主要分类
1.2 脂肪细胞的增殖
1.3 ELOVL蛋白家族
1.4 ELOVL6基因结构与功能概述
1.4.1 ELOVL6对细胞增殖的作用
1.4.2 ELOVL6对脂肪酸代谢的作用
1.4.3 ELOVL6转录调控研究
1.4.4 ELOVL6对疾病的作用
1.5 本研究的目的与意义
1.6 研究内容及技术路线
1.6.1 研究内容
1.6.2 技术路线
第二章 秦川肉牛ELOVL6 CDS克隆及表达模式分析
2.1 材料与方法
2.1.1 试验材料
2.1.2 试验方法
2.2 结果与分析
2.2.1 ELOVL6基因序列分析
2.2.2 牛ELOVL6 基因CDS区克隆与鉴定
2.2.3 ELOVL6蛋白序列生物进化与同源性分析
2.2.4 ELOVL6组织表达谱分析及亚细胞定位
2.3 讨论
2.4 小结
第三章 ELOVL6对秦川肉牛前体脂肪细胞增殖的作用机理研究
3.1 材料与方法
3.1.1 试验材料
3.1.2 试验方法
3.2 结果与分析
3.2.1 ELOVL6过表达腺病毒载体的构建与重组腺病毒包装
3.2.2 ELOVL6干扰腺病毒载体的构建与重组腺病毒包装
3.2.3 ELOVL6促进前体脂肪细胞的增殖
3.2.4 ELOVL6干扰延长前体脂肪细胞增殖周期
3.2.5 ELOVL6促进细胞增殖相关基因的表达
3.2.6 ELOVL6 通过m TOR/p70S6K信号通路促进前体脂肪细胞增殖
3.2.7 干扰ELOVL6促进前体脂肪细胞凋亡
3.3 讨论
3.3.1 腺病毒载体系统介导ELOVL6的干扰与过表达
3.3.2 ELOVL6促进前体脂肪细胞的增殖
3.3.3 ELOVL6激活m TOR信号通路
3.3.4 干扰ELOVL6促进前体脂肪细胞凋亡
3.4 小结
第四章 ELOVL6对秦川肉牛脂肪细胞脂质代谢的作用研究
4.1 材料与方法
4.1.1 试验材料
4.1.2 试验方法
4.2 结果与分析
4.2.1 ELOVL6随脂肪细胞分化的表达谱分析
4.2.2 ELOVL6过表达、干扰效率检测
4.2.3 脂滴染色
4.2.4 ELOVL6影响脂肪细胞脂肪酸组成
4.2.5 ELOVL6 影响ELOVLs家族其他基因表达量变化
4.2.6 RNA-seq测序验证ELOVL6 基因对脂肪细胞脂质代谢的作用
4.2.7 q RT-PCR验证脂质代谢相关差异表达基因
4.3 讨论
4.3.1 ELOVL6影响秦川肉牛脂肪细胞脂肪酸组成
4.3.2 ELOLV6调控脂质代谢相关通路和基因的表达
4.4 小结
第五章 转录因子PU.1、SREBP1和KLF6对ELOVL6 启动子活性的影响
5.1 材料与方法
5.1.1 试验材料
5.1.2 试验方法
5.2 结果与分析
5.2.1 ELOVL6启动子区域扩增
5.2.2 ELOVL6 启动子序列分析及Cp G岛预测
5.2.3 ELOVL6逐段缺失片段扩增
5.2.4 重组质粒p GL3-ELOVL6 Promoter的鉴定
5.2.5 ELOVL6启动子逐段缺失片段活性检测
5.2.6 PU.1、KLF6和SREBP1 转录因子结合位点保守性预测
5.2.7 PU.1、KLF6和SREBP1 结合位点突变影响ELOVL6 启动子活性
5.2.8 EMSA验证PU.1、KLF6和SREBP1 转录因子结合ELOVL6 启动子
5.2.9 Ch IP验证PU.1和SREBP1 体内结合于ELOVL6 启动子
5.2.10 干扰PU.1、KLF6和SREBP1 影响ELOVL6 启动子的活性
5.3 讨论
5.4 小结
第六章 结论
6.1 研究结论
6.2 创新点
参考文献
附录
附录A 主要试剂与设备
附录B 试验操作步骤
附录C ELOVL6 基因CDS和启动子序列
致谢
个人简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]腺病毒载体介导Smad3基因在秦川牛前体脂肪细胞中的过表达和沉默[J]. 张乐,宁越,李佩韦,王洪宝,昝林森. 畜牧兽医学报. 2018(09)
[2]腺病毒载体的研究进展[J]. 刘阳,杜联芳. 医学综述. 2015(24)
[3]秦川牛肉用选育改良及产业化开发[J]. 昝林森,王洪程,梅楚刚. 农业生物技术学报. 2015(01)
[4]Identification and characterization of genes that control fat deposition in chickens[J]. Hirwa Claire D’Andre,Wallace Paul,Xu Shen,Xinzheng Jia,Rong Zhang,Liang Sun,Xiquan Zhang. Journal of Animal Science and Biotechnology. 2014(01)
[5]腺病毒载体的研究新进展[J]. 刘思景,郭伟韬,王辉. 现代中西医结合杂志. 2010(13)
博士论文
[1]MEF2A对秦川牛骨骼肌成肌细胞增殖和分化的调控作用及机理研究[D]. 王亚宁.西北农林科技大学 2019
[2]基于多组学的秦川牛、黑毛和牛、安格斯牛与大额牛遗传特性研究[D]. 梅楚刚.西北农林科技大学 2017
[3]基因表达首达时的调控及其动力学行为[D]. 李秋英.广州大学 2017
[4]猪肉脂肪酸组成的遗传解析[D]. 张万昌.江西农业大学 2016
[5]miR-664下调靶基因FOXO4促进骨肉瘤细胞恶性增殖及机制研究[D]. 陈斌.南方医科大学 2016
[6]miR-224、miR-146b、miR-215和miR-135a 对脂肪细胞分化和脂质代谢的作用研究[D]. 彭永东.华中农业大学 2014
[7]SREBPs调控牛前体脂肪细胞与成纤维细胞脂质代谢的研究[D]. 付常振.西北农林科技大学 2014
[8]Hedgehog信号通路调控牛肌卫星细胞增殖和分化的研究[D]. 刘扬.西北农林科技大学 2014
[9]牛CCAAT增强子结合蛋白家族（C/EBPs）诱导细胞转分化的研究[D]. 王虹.西北农林科技大学 2013
[10]真核基因转录调控元件识别及转录调控关系构建[D]. 王进.南京大学 2011
硕士论文
[1]西农萨能奶山羊超长链脂肪酸延伸酶6（ELOVL6）基因启动子转录调控机理研究[D]. 赫秋亚.西北农林科技大学 2016
[2]奶山羊乳腺上皮细胞超长链脂肪酸延伸酶6（ELOVL6）基因的超表达与干扰研究[D]. 吴敏.西北农林科技大学 2014
[3]胃癌和癌旁组织抑癌基因蛋白Runx3的表达及其与p21相关性研究[D]. 张湧.兰州大学 2007
本文编号：3167254
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：126 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
主要符号对照表
第一章 文献综述
1.1 脂肪酸合成及分类
1.1.1 脂肪酸的合成
1.1.2 脂肪酸的主要分类
1.2 脂肪细胞的增殖
1.3 ELOVL蛋白家族
1.4 ELOVL6基因结构与功能概述
1.4.1 ELOVL6对细胞增殖的作用
1.4.2 ELOVL6对脂肪酸代谢的作用
1.4.3 ELOVL6转录调控研究
1.4.4 ELOVL6对疾病的作用
1.5 本研究的目的与意义
1.6 研究内容及技术路线
1.6.1 研究内容
1.6.2 技术路线
第二章 秦川肉牛ELOVL6 CDS克隆及表达模式分析
2.1 材料与方法
2.1.1 试验材料
2.1.2 试验方法
2.2 结果与分析
2.2.1 ELOVL6基因序列分析
2.2.2 牛ELOVL6 基因CDS区克隆与鉴定
2.2.3 ELOVL6蛋白序列生物进化与同源性分析
2.2.4 ELOVL6组织表达谱分析及亚细胞定位
2.3 讨论
2.4 小结
第三章 ELOVL6对秦川肉牛前体脂肪细胞增殖的作用机理研究
3.1 材料与方法
3.1.1 试验材料
3.1.2 试验方法
3.2 结果与分析
3.2.1 ELOVL6过表达腺病毒载体的构建与重组腺病毒包装
3.2.2 ELOVL6干扰腺病毒载体的构建与重组腺病毒包装
3.2.3 ELOVL6促进前体脂肪细胞的增殖
3.2.4 ELOVL6干扰延长前体脂肪细胞增殖周期
3.2.5 ELOVL6促进细胞增殖相关基因的表达
3.2.6 ELOVL6 通过m TOR/p70S6K信号通路促进前体脂肪细胞增殖
3.2.7 干扰ELOVL6促进前体脂肪细胞凋亡
3.3 讨论
3.3.1 腺病毒载体系统介导ELOVL6的干扰与过表达
3.3.2 ELOVL6促进前体脂肪细胞的增殖
3.3.3 ELOVL6激活m TOR信号通路
3.3.4 干扰ELOVL6促进前体脂肪细胞凋亡
3.4 小结
第四章 ELOVL6对秦川肉牛脂肪细胞脂质代谢的作用研究
4.1 材料与方法
4.1.1 试验材料
4.1.2 试验方法
4.2 结果与分析
4.2.1 ELOVL6随脂肪细胞分化的表达谱分析
4.2.2 ELOVL6过表达、干扰效率检测
4.2.3 脂滴染色
4.2.4 ELOVL6影响脂肪细胞脂肪酸组成
4.2.5 ELOVL6 影响ELOVLs家族其他基因表达量变化
4.2.6 RNA-seq测序验证ELOVL6 基因对脂肪细胞脂质代谢的作用
4.2.7 q RT-PCR验证脂质代谢相关差异表达基因
4.3 讨论
4.3.1 ELOVL6影响秦川肉牛脂肪细胞脂肪酸组成
4.3.2 ELOLV6调控脂质代谢相关通路和基因的表达
4.4 小结
第五章 转录因子PU.1、SREBP1和KLF6对ELOVL6 启动子活性的影响
5.1 材料与方法
5.1.1 试验材料
5.1.2 试验方法
5.2 结果与分析
5.2.1 ELOVL6启动子区域扩增
5.2.2 ELOVL6 启动子序列分析及Cp G岛预测
5.2.3 ELOVL6逐段缺失片段扩增
5.2.4 重组质粒p GL3-ELOVL6 Promoter的鉴定
5.2.5 ELOVL6启动子逐段缺失片段活性检测
5.2.6 PU.1、KLF6和SREBP1 转录因子结合位点保守性预测
5.2.7 PU.1、KLF6和SREBP1 结合位点突变影响ELOVL6 启动子活性
5.2.8 EMSA验证PU.1、KLF6和SREBP1 转录因子结合ELOVL6 启动子
5.2.9 Ch IP验证PU.1和SREBP1 体内结合于ELOVL6 启动子
5.2.10 干扰PU.1、KLF6和SREBP1 影响ELOVL6 启动子的活性
5.3 讨论
5.4 小结
第六章 结论
6.1 研究结论
6.2 创新点
参考文献
附录
附录A 主要试剂与设备
附录B 试验操作步骤
附录C ELOVL6 基因CDS和启动子序列
致谢
个人简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]腺病毒载体介导Smad3基因在秦川牛前体脂肪细胞中的过表达和沉默[J]. 张乐,宁越,李佩韦,王洪宝,昝林森. 畜牧兽医学报. 2018(09)
[2]腺病毒载体的研究进展[J]. 刘阳,杜联芳. 医学综述. 2015(24)
[3]秦川牛肉用选育改良及产业化开发[J]. 昝林森,王洪程,梅楚刚. 农业生物技术学报. 2015(01)
[4]Identification and characterization of genes that control fat deposition in chickens[J]. Hirwa Claire D’Andre,Wallace Paul,Xu Shen,Xinzheng Jia,Rong Zhang,Liang Sun,Xiquan Zhang. Journal of Animal Science and Biotechnology. 2014(01)
[5]腺病毒载体的研究新进展[J]. 刘思景,郭伟韬,王辉. 现代中西医结合杂志. 2010(13)
博士论文
[1]MEF2A对秦川牛骨骼肌成肌细胞增殖和分化的调控作用及机理研究[D]. 王亚宁.西北农林科技大学 2019
[2]基于多组学的秦川牛、黑毛和牛、安格斯牛与大额牛遗传特性研究[D]. 梅楚刚.西北农林科技大学 2017
[3]基因表达首达时的调控及其动力学行为[D]. 李秋英.广州大学 2017
[4]猪肉脂肪酸组成的遗传解析[D]. 张万昌.江西农业大学 2016
[5]miR-664下调靶基因FOXO4促进骨肉瘤细胞恶性增殖及机制研究[D]. 陈斌.南方医科大学 2016
[6]miR-224、miR-146b、miR-215和miR-135a 对脂肪细胞分化和脂质代谢的作用研究[D]. 彭永东.华中农业大学 2014
[7]SREBPs调控牛前体脂肪细胞与成纤维细胞脂质代谢的研究[D]. 付常振.西北农林科技大学 2014
[8]Hedgehog信号通路调控牛肌卫星细胞增殖和分化的研究[D]. 刘扬.西北农林科技大学 2014
[9]牛CCAAT增强子结合蛋白家族（C/EBPs）诱导细胞转分化的研究[D]. 王虹.西北农林科技大学 2013
[10]真核基因转录调控元件识别及转录调控关系构建[D]. 王进.南京大学 2011
硕士论文
[1]西农萨能奶山羊超长链脂肪酸延伸酶6（ELOVL6）基因启动子转录调控机理研究[D]. 赫秋亚.西北农林科技大学 2016
[2]奶山羊乳腺上皮细胞超长链脂肪酸延伸酶6（ELOVL6）基因的超表达与干扰研究[D]. 吴敏.西北农林科技大学 2014
[3]胃癌和癌旁组织抑癌基因蛋白Runx3的表达及其与p21相关性研究[D]. 张湧.兰州大学 2007
本文编号：3167254
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