钩吻生物碱在猪体内药物动力学及消除规律研究

发布时间：2021-05-15 08:12

　　钩吻（Gelsemium）是一种常被用于治疗神经疼痛、抗肿瘤的传统中药,对人有毒,对猪和羊等食源性动物具有促生长作用。由于钩吻对人和对动物具有种属差异性,钩吻在动物体内是否存在组织残留,是否影响动物源性食品安全,目前未见报道。现代医学证明钩吻主要活性物质是钩吻生物碱,然而,目前尚未进行钩吻作用的物质基础和残留消除规律的研究。因此,本文在实验室前期建立的钩吻化学成分谱基础上,主要以LC-MS/MS分析技术为手段,从整体上对钩吻生物碱在猪体内的药物动力学和残留消除规律进行研究,明确其入血成分在体内的药物动力学特征及其动态变化、消除规律。相关研究结果将为钩吻中兽药开发、临床合理使用、制定质量标准和药理作用研究奠定基础,也为动物性食品安全评价提供科学依据。1.猪血浆和组织中三种钩吻生物碱定量/确证方法研究建立了可以同时在猪血浆和组织中检测钩吻素甲、钩吻素子和钩吻素己的LC-MS/MS检测方法,并对其进行了特异性、专一性、基质效应、线性及线性关系、LOD和LOQ、准确度、精密度以及稳定性等方法学考察,结果显示,钩吻素甲、钩吻素子和钩吻素己在猪血浆和在猪肌肉、肝脏和肾脏中特异性良好,线性关系大于0... 

【文章来源】：湖南农业大学湖南省

【文章页数】：166 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
第1章 前言
    1.1 立题依据
    1.2 历史溯源
    1.3 钩吻化学组成成分研究进展
        1.3.1 钩吻生物碱研究进展
            1.3.1.1 钩吻素甲类
            1.3.1.2 钩吻素子类
            1.3.1.3 甲基钩吻素乙类（gelsedine-type）
            1.3.1.4 胡蔓藤乙素类（humantenine-type）
            1.3.1.5 蛇根碱类（sarpagine-type）
            1.3.1.6 育亨烷（Yohimbane）型/常绿钩吻碱类型
            1.3.1.7 其他未归属类型的钩吻生物碱
        1.3.2 钩吻非生物碱成分研究进展
            1.3.2.1 环烯醚萜类
            1.3.2.2 油脂类
            1.3.2.3 三萜类
            1.3.2.4 甾体及其苷类
            1.3.2.5 香豆素类和黄酮类
            1.3.2.6 木脂素类
            1.3.2.7 酚酸类
            1.3.2.8 果糖及其衍生物
            1.3.2.9 Megastigmane 型苷类化合物
    1.4 钩吻药理和毒性作用研究进展
        1.4.1 钩吻的抗肿瘤作用
        1.4.2 钩吻的镇痛抗焦虑作用
        1.4.3 钩吻的抗炎作用
        1.4.4 钩吻的促生长作用
        1.4.5 钩吻毒性作用
    1.5 钩吻药物代谢动力学研究进展
        1.5.1 钩吻素子药物代谢动力学研究
        1.5.2 钩吻素甲的体内外药物代谢动力学研究
    1.6 研究内容与意义
        1.6.1 研究内容、目标
        1.6.2 研究意义
第2章 猪血浆和组织中三种钩吻生物碱定量/确证方法研究
    2.1 引言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 标准对照品
        2.2.2 主要试剂
        2.2.3 样品的采集与保存
        2.2.4 主要仪器
        2.2.5 制样方法
        2.2.6 分析测定条件
    2.3 定量确证方法的建立
        2.3.1 血浆中标准曲线和工作曲线的制备
        2.3.2 肌肉、肝脏和肾脏中标准曲线和工作曲线的制备
        2.3.3 计算公式
        2.3.4 基质效应的测定
        2.3.5 LOD和LOQ 测定
        2.3.6 准确度和精密度实验
        2.3.7 稳定性实验
        2.3.8 三种钩吻生物碱在猪血浆和组织中的方法外推
    2.4 结果
        2.4.1 血浆样品前处理优化结果
        2.4.2 三种钩吻标准品在血浆中定量/确证方法结果
            2.4.2.1 质谱条件的优化
            2.4.2.2 液相条件的优化
            2.4.2.3 特异性和离子丰度比
            2.4.2.4 基质效应
            2.4.2.5 LOD和LOQ
            2.4.2.6 工作曲线和线性范围
            2.4.2.7 准确度和精密度
            2.4.2.8 稳定性
        2.4.3 猪肌肉、肝脏和肾脏样品前处理优化结果
        2.4.4 三种钩吻标准品在猪肌肉、肝脏和肾脏中确证方法结果
            2.4.4.1 质谱条件的优化
            2.4.4.2 特异性与专一性
            2.4.4.3 基质效应
            2.4.4.4 LOD和LOQ
            2.4.4.5 工作曲线和线性范围
            2.4.4.6 准确度和精密度
        2.4.5 三种钩吻标准品血浆方法外推在猪尿液和胆汁中的结果
        2.4.6 三种钩吻标准品在方法外推在猪其他组织中的结果
    2.5 讨论与分析
        2.5.1 质谱条件的选择
        2.5.2 液相条件的选择
        2.5.3 猪血浆方法中提取试剂的选择
        2.5.4 猪肌肉、肝脏和肾脏中提取、净化步骤的选择
        2.5.5 方法学考察
        2.5.6 猪血浆和猪组织中方法应用于猪尿液、胆汁和其他组织中的可行性分析
        2.5.7 内标物质遴选
    2.6 小结
第3章 猪血浆和组织中钩吻总生物碱定量/确证方法研究
    3.1 引言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 标准对照品
        3.2.2 主要试剂
        3.2.3 样品的采集与保存
        3.2.4 主要仪器
        3.2.5 制样方法
        3.2.6 分析测定条件
    3.3 定量确证方法的建立
        3.3.1 多组分钩吻生物碱整体定量分析策略
        3.3.2 标准曲线和工作曲线的制备
        3.3.3 计算公式
        3.3.4 基质效应的测定
        3.3.5 LOD和LOQ测定
        3.3.6 准确度和精密度实验
        3.3.7 钩吻总生物碱在猪血浆和组织中的方法外推
    3.4 结果
        3.4.1 钩吻标准品在血浆中定量/确证方法结果
            3.4.1.1 多组分钩吻生物碱液相-质谱参数优化
            3.4.1.2 多组分钩吻生物碱名称的鉴别
            3.4.1.3 特异性
            3.4.1.4 基质效应
            3.4.1.5 LOD和LOQ
            3.4.1.6 工作曲线和线性范围
            3.4.1.7 准确度和精密度
            3.4.1.8 稳定性
        3.4.2 钩吻总生物碱在猪肌肉、肝脏和肾脏中定量/确证方法结果
            3.4.2.1 多组分钩吻生物碱液相-质谱条件的优化
            3.4.2.2 特异性
            3.4.2.3 基质效应
            3.4.2.4 LOD和LOQ
            3.4.2.5 工作曲线和线性范围
            3.4.2.6 准确度和精密度
        3.4.3 多组分钩吻生物碱方法外推结果
    3.5 讨论
        3.5.1 多组分钩吻总生物碱质谱参数优化
        3.5.2 分析条件的选择
        3.5.3 钩吻总生物碱方法学考察
    3.6 小结
第4 章钩吻生物碱在猪体内药物动力学研究
    4.1 引言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 材料
        4.2.2 方法
            4.2.2.1 实验分组
            4.2.2.2 灌胃方法
            4.2.2.3 样品采集与保存
            4.2.2.4 样品制备与检测
            4.2.2.5 数据处理方法与计算
    4.3 结果
        4.3.1 精制钩吻生物碱单次药物动力学实验结果
            4.3.1.1 三种钩吻生物标准品动力学实验结果
        4.3.2 钩吻总生物碱动力学实验结果
        4.3.3 钩吻全草粉末多次药物动力学实验结果
            4.3.3.1 三种钩吻生物标准品动力学实验结果
            4.3.3.2 钩吻总生物碱动力学实验结果
    4.4 讨论
        4.4.1 三种钩吻标准品在猪体内单次血浆药动学
        4.4.2 钩吻总生物碱猪体内单次血浆药动学
        4.4.3 三种钩吻标准品在猪体内多次血浆药动学
        4.4.4 钩吻总生物碱在猪体内多次血浆药动学
    4.5 小结
第5 章钩吻生物碱分布及其消除规律研究
    5.1 引言
    5.2 材料与方法
        5.2.1 材料
        5.2.2 方法
            5.2.2.1 猪饲养钩吻后行为学观察
            5.2.2.2 血常规检测
            5.2.2.3 组织病理学观察
            5.2.2.4 组织样品采集
            5.2.2.5 样品制备与检测
            5.2.2.6 残留消除常数的计算
    5.3 结果
        5.3.1 行为学观察结果
        5.3.2 料肉比、血常规以及尿常规结果
        5.3.3 组织切片结果
        5.3.4 钩吻全草中三种钩吻生物碱分布及消除实验结果
        5.3.5 钩吻总生物碱分布及消除实验结果
    5.4 讨论
        5.4.1 料肉比、血常规、尿常规及组织切片分析
        5.4.2 钩吻生物碱分布与消除规律分析
    5.5 小结
第6章 钩吻生物碱代谢物组学初步研究
    6.1 引言
    6.2 材料与方法
        6.2.1 主要试剂
        6.2.2 主要仪器
        6.2.3 样品的采集与保存
        6.2.4 分析条件
        6.2.5 血浆样品的制备
        6.2.6 数据分析
    6.3 结果
        6.3.1 仪器稳定性和方法稳定性检验结果
        6.3.2 差异代谢物鉴定分析
        6.3.3 差异代谢物的筛选
        6.3.4 潜在生物标志物的遴选以及代谢通路的推导
    6.4 讨论
    6.5 小结
第7章 全文总结与创新点
参考文献
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【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
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[2]动物可食性组织中兽药多残留检测关键技术研究[D]. 余欢.华中农业大学 2010

硕士论文
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[2]柳叶亚菊和钩吻化学成分研究[D]. 巫洪儒.兰州大学 2013
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[4]胡蔓藤中非生物碱类化学成分研究[D]. 付艳辉.沈阳药科大学 2007



本文编号：3187290