Asia 1型口蹄疫病毒样颗粒疫苗研究

发布时间：2021-08-01 01:50

　　口蹄疫（Foot-and-Mouth Disease,FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV）引起的、以偶蹄动物发病为主的一种急性、热性、高度接触传染性动物疫病。FMD是对畜牧业发展威胁最大烈性传染病之一,被世界动物卫生组织（World Organisation for Animal Health,OIE）列为必须报告的动物疫病。目前,包括我国在内的许多国家,采取免疫接种疫苗的措施控制口蹄疫。不同时期,口蹄疫弱毒疫苗、灭活疫苗等使用,在控制口蹄疫的大流行中发挥了重要作用。弱毒疫苗因毒力返强引起口蹄疫流行而被停用。目前,大多使用的灭活疫苗,虽然较弱毒疫苗安全,但在病毒大量培养和灭活等生产过程中仍然存在极大的生物安全风险,而且对疫苗生产的设施条件要求高,同样存在灭活不完全而引起口蹄疫暴发的风险。因此,需要研究安全、有效的口蹄疫新型疫苗。随着免疫学和基因工程技术的快速发展,表达口蹄疫病毒主要功能结构蛋白基因,在体外组装病毒样颗粒,以此为抗原研制疫苗成为口蹄疫疫苗研究热点。本研究利用原核表达系统,将Asia 1型口蹄疫病毒的VP0、VP1、V... 

【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省

【文章页数】：93 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

目的基因的凝胶电泳Fig.2-1IdentificationoftargetgenebyRT-PCR250

甘肃农业大学博士学位论文第二章重组载体的构建及其表达和病毒样颗粒组装24图2-2重组融合蛋白SDS-PAGE（A，1-4）和Westernblot（B，5-8）鉴定Fig.2-2ExpressionandassemblyofpurifiedFMDVcapsidproteins.单独表达：SUMO-VP3（1和8）36Kd，SUMO-VP1（2和7）35kD，SUMO-VP0（3和6）45kD同时表达：SUMO标记蛋白复合物（4和5）A.SDS-PAGE(leftpanel,lanesM,1–4)andBWesternblot(rightpanel,lanes5–8)analysisofthepurifiedcapsidproteincomplexeswithoutUlp1proteasetreatment,includingtheSUMO-taggedFMDVVP3proteinexpressedindividually(lanes1and8),theSUMO-taggedFMDVVP1proteinexpressedindividually(lanes2and7),theSUMO-taggedFMDVVP0proteinexpressedindividually(lanes3and6)andthethreeSUMO-taggedproteincompleximultaneouslyexpressed(lanes4and5).3.4病毒样颗粒的体外组装用小泛素样修饰蛋白酶酶切融合蛋白的SUMO标签，经SDS-PAGE和Westernblot可见预期大小的VP0（33kD）、VP3（24kD）和VP1（23kD）蛋白（图2-3）。酶切产物经磷钨酸染色，用透射电镜观察，可见约20nm左右，形态如口蹄疫病毒的圆形颗粒，电镜观察结果证实在体外成功组装获得了病毒样颗粒（图2-4）。AB图2-3酶切纯化融合蛋白SDS-PAGE(1)和Westernblot（2）鉴定Fig.2-3SDS-PAGE(lane1)andWesternblot(lane2)analysisofthepurifiedthreeSUMO-taggedproteincomplexafterproteasedigestionandthesecondaffinitychromatographyM:蛋白质分子质量标准；VP0：33kD；VP3：24kD；VP1：23kDM：ProteinMarker；VP0：33kD；VP3：24kD；VP1：23kDSDS-PAGE(lane1)andWesternblot(lane2)analysisofthepurifiedthreeSUMO-taggedproteincomplexafterp

analysisofthepurifiedcapsidproteincomplexeswithoutUlp1proteasetreatment,includingtheSUMO-taggedFMDVVP3proteinexpressedindividually(lanes1and8),theSUMO-taggedFMDVVP1proteinexpressedindividually(lanes2and7),theSUMO-taggedFMDVVP0proteinexpressedindividually(lanes3and6)andthethreeSUMO-taggedproteincompleximultaneouslyexpressed(lanes4and5).3.4病毒样颗粒的体外组装用小泛素样修饰蛋白酶酶切融合蛋白的SUMO标签，经SDS-PAGE和Westernblot可见预期大小的VP0（33kD）、VP3（24kD）和VP1（23kD）蛋白（图2-3）。酶切产物经磷钨酸染色，用透射电镜观察，可见约20nm左右，形态如口蹄疫病毒的圆形颗粒，电镜观察结果证实在体外成功组装获得了病毒样颗粒（图2-4）。AB图2-3酶切纯化融合蛋白SDS-PAGE(1)和Westernblot（2）鉴定Fig.2-3SDS-PAGE(lane1)andWesternblot(lane2)analysisofthepurifiedthreeSUMO-taggedproteincomplexafterproteasedigestionandthesecondaffinitychromatographyM:蛋白质分子质量标准；VP0：33kD；VP3：24kD；VP1：23kDM：ProteinMarker；VP0：33kD；VP3：24kD；VP1：23kDSDS-PAGE(lane1)andWesternblot(lane2)analysisofthepurifiedthreeSUMO-taggedproteincomplexafterproteasedigestionandthesecondaffinitychromatography

【参考文献】：
期刊论文
[1]全国范围内将停止亚洲Ⅰ型口蹄疫免疫[J]. 吴洋.  农业知识. 2018(09)
[2]全球口蹄疫防控技术及病原特性研究概观[J]. 刘在新.  中国农业科学. 2015(17)
[3]我国O型Mya-98口蹄疫病毒流行情况与毒株分析[J]. 何继军,杨亚民,马维民,尚佑军,吕律,郑海学,靳野,郭建宏,刘在新,刘湘涛.  中国动物检疫. 2014(05)
[4]口蹄疫病毒O型Mya98谱系猪源毒株和牛源毒株全基因组的比较[J]. 吕律,杨帆,何继军,靳野,郭建宏,郑海学,刘湘涛.  中国兽医科学. 2014(02)
[5]口蹄疫及其防控技术[J]. 郑海学,何继军,郭建宏,刘湘涛.  兽医导刊. 2012(12)
[6]Spatial Trend of Foot and Mouth Disease Virus （FMDV） Serotypes in Cattle and Buffaloes, Pakistan[J]. Muhammad Abubakar,Muhammad Javed Arshed,Qurban Ali,Manzoor Hussain.  Virologica Sinica. 2012(05)
[7]Asia1型口蹄疫病毒第V群猪源和牛源毒株全基因组比较分析[J]. 郑海学,靳野,尚佑军,郭建宏,田宏,杨亚民,刘湘涛,才学鹏.  微生物学通报. 2010(09)
[8]口蹄疫防控技术[J]. 刘湘涛.  兽医导刊. 2008(04)
[9]WTO对家畜口蹄疫流行和无口蹄疫状态的规定[J]. 田纯见,曹永长,毕英佐.  中国兽医杂志. 2003(07)



本文编号：3314600