两种侧耳高温胁迫导致的细胞凋亡研究和球孢白僵菌胁迫响应转录机制的研究

发布时间：2021-10-02 07:54

　　由于学习期间获得国家留学基金委的资助,博士论文的相关研究分别在中国农业科学院农业资源与农业区划研究所和佛罗里达大学微生物学和细胞生物学系进行,故研究内容分为两个部分。第一部分:两种侧耳高温胁迫导致的细胞凋亡研究。我国食用菌产业经过30多年高速发展,在种植业中,成为位居粮、菜、果、油之后的第五大作物,2013年产量已超过3100万吨、产值超过1700亿元。其中平菇产量位居第二,超过总产的18%,而糙皮侧耳和肺形侧耳是平菇的主要栽培种。但长期以来我国平菇的生产大多采用农业方式的粗放栽培,受自然环境条件影响较大。特别是在生长中常遭遇到高温天气。高温（>38oC）是影响食用菌生长发育的重要环境因子,但高温胁迫下相关响应机制的研究报道很少。为了探究食用菌发菌期高温的危害机理,以侧耳属（Pleurotus）的两个主要栽培栽培种P.ostreatus和P.pulmonarius的两个生产品种CCMSSC00358（特白一号）和CCMSSC00493（凤尾菇）为实验材料,在高温胁迫下（42℃,0.5h-4h）,检测了细胞核浓缩情况,细胞活性氧水平和染色体DNA的片段化,以探讨菌丝细胞凋亡的发生情... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：105 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1 细胞凋亡概述
    1.2 丝状真菌细胞凋亡的研究方法
        1.2.1 细胞核浓缩的检测
        1.2.2 活性氧积累的检测
        1.2.3 DNA断裂的检测
    1.3 丝状真菌细胞凋亡的研究进展
        1.3.1 化合物诱导对丝状真菌细胞凋亡的研究进展
        1.3.2 环境胁迫对丝状真菌细胞凋亡的研究进展
    1.4 高温胁迫下食用菌的研究进展
    1.5 转录因子概述
    1.6 转录因子的研究方法
        1.6.1 凝胶迁移实验
        1.6.2 DNase I足迹法
        1.6.3 染色质免疫沉淀
        1.6.4 电化学阻抗谱
    1.7 球孢白僵菌转录因子研究进展
        1.7.1 转录因子MSN2研究进展
        1.7.2 转录辅因子MBF1研究进展
        1.7.3 通用转录因子TBP研究进展
    1.8 本研究的内容、目的和意义
第二章 两种侧耳高温胁迫导致的细胞凋亡研究
    2.1 试验材料
        2.1.1 试验菌株及培养基
        2.1.2 试验试剂
    2.2 试验仪器
    2.3 试验方法
        2.3.1 菌丝培养
        2.3.2 高温胁迫处理
        2.3.3 细胞核浓缩检测
        2.3.4 活性氧积累检测
        2.3.5 DNA片段化检测
        2.3.6 外源添加剂对真菌细胞凋亡的影响
        2.3.7 统计分析
    2.4 结果与分析
        2.4.1 高温胁迫下细胞核的变化
        2.4.2 高温胁迫下活性氧的变化
        2.4.3 高温胁迫下DNA片段化的变化
    2.5 讨论
第三章 球孢白僵菌转录因子Bb MSN2与靶基因启动子相互作用的研究
    3.1 试验材料
        3.1.1 试验菌株及培养基
        3.1.2 试验载体
        3.1.3 试验试剂
    3.2 试验仪器
    3.3 试验方法
        3.3.1 真菌培养
        3.3.2 Bb MSN2表达载体的构建
        3.3.3 Bb MSN2蛋白的外源表达和纯化
        3.3.4 靶基因启动子的扩增和特异探针的合成
        3.3.5 凝胶迁移实验
        3.3.6 数据分析
    3.4 结果与分析
        3.4.1 p ET28GST-Bb MSN2表达载体的构建
        3.4.2 Bb MSN2蛋白的生物信息学分析
        3.4.3 Bb MSN2蛋白的外源表达和纯化
        3.4.4 Bb MSN2蛋白结合位点的分析
        3.4.5 靶基因启动子序列分析
        3.4.6 Bb MSN2蛋白与核酸的相互作用
    3.5 讨论
第四章 球孢白僵菌Bb TBP与TATA-box及Bb MBF1相互作用的研究
    4.1 试验材料
        4.1.1 试验菌株及培养基
        4.1.2 试验载体
        4.1.3 试验试剂
    4.2 试验仪器
    4.3 试验方法
        4.3.1 真菌培养
        4.3.2 Bb TBP和Bb MBF1表达载体的构建
        4.3.3 Bb TBP和Bb MBF1蛋白的外源表达和纯化
        4.3.4 TATA-box序列的分析和合成
        4.3.5 凝胶迁移实验
        4.3.6 电化学阻抗谱分析
    4.4 结果与分析
        4.4.1 p ET 28a-Bb TBP和p ET 28a-Bb MBF1表达载体的构建
        4.4.2 Bb TBP和Bb MBF1蛋白的生物信息学分析
        4.4.3 Bb TBP和Bb MBF1蛋白的表达及纯化
        4.4.4 Bb TBP结合位点的序列分析
        4.4.5 Bb TBP与TATA box探针的相互作用
        4.4.6 Bb TBP与Bb MBF1蛋白间的相互作用
    4.5 讨论
第五章 结论
    5.1 本研究的主要结论
    5.2 创新点
    5.3 有待进一步研究的问题
参考文献
致谢
作者简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]肺形侧耳高温后恢复期间海藻糖代谢途径研究[J]. 刘秀明,黄晨阳,陈强,邬向丽,张金霞.  中国农业科学. 2013(24)
[2]外源海藻糖对高温胁迫下肺形侧耳氧化损伤的缓解效应[J]. 刘秀明,黄晨阳,陈强,邬向丽,张金霞.  园艺学报. 2013(08)



本文编号：3418279