兔出血症病毒遗传变异分析及杆状病毒载体灭活疫苗研制

发布时间：2021-10-19 10:25

　　兔出血症病毒（RHDV,Rabbit Hemorrhagic Disease Virus）属于杯状病毒科,能够引起兔病毒性出血症（RHD,Rabbit Hemorrhagic Disease）。VP60蛋白是RHDV的主要结构蛋白,在动物体内可诱导产生中和抗体,与免疫反应直接相关。由于尚未建立兔出血症病毒在体外组织细胞的培养方法,目前广泛使用的RHD疫苗仍为组织灭活疫苗,虽然临床上其具有良好的免疫效果,但组织灭活苗自身具有不可避免的一些缺陷。因此,本研究首先对RHDV中国流行株进行了遗传变异分析,接着通过构建重组杆状病毒,在昆虫细胞中表达VP60基因并制备成疫苗,并研究其抗原性和免疫原性,为研究RHDV杆状病毒载体灭活疫苗奠定了基础。主要研究内容如下:1.2009～2014年我国兔出血症病毒遗传变异分析为了调查中国兔出血症病毒毒株的遗传变异和进化,我们对GenBank数据库上包括41株中国毒株在内的190株国内外兔出血症病毒VP60序列进行了分析,主要内容包括:（1）对所有中国RHDV毒株的基因型进行了分析,发现41株中国毒株中WX/China/1984株、HB/2014株和HB株属于... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

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【部分图文】：

图１?－１?ＲＨＤＶ病毒粒子电镜图和ｃｒｙｏＥＭ重建ＲＨＤＶ子［１８］??

．２ｋｂ的亚基因组ＲＮＡ?（ｓｇＲＮＡ）?［１９’??２Ｇ］，常在病毒感染后期编码高水平的结构蛋白ＶＰ６０和ＶＰ１０［２１—２４］。基因组ＲＮＡ和亚??基因组ＲＮＡ通过Ｔｙｒ－２１残基共价结合到ＶＰｇ蛋白［２５］，而ＶＰｇ蛋白在病毒的转录中??起关键作用［２６］。基因组ＲＮＡ含有两个开放阅读框（ＯＲＦ）?，?０ＲＦ１编码一个２５７ｋＤａ??大小的多聚蛋白［１９］，该蛋白通过病毒编码的胰蛋白酶样半胱氨酸酶进行翻译后修饰，??可裂解为多个成熟的非结构蛋白和两个蛋白［２（），２７＇２９］（图１－２）。??Ｇｅｎｏｍｉｃ?ＲＮＡ?（－７．４?ｋｂ）??ｓ?广、?ＯＲＦ１?３??（ｖＰｇＨ???ｒ＊???０ＲＦ２??ｔｒａｍｌｏｔｉｏｎ??ｐ１６?ｐｒｏｔｅａｓｅ??ｐ２３?ｈｅｌｉｃｄｓ？?ｐ２９?ＶＰｇ?ＲｄＲｐ?ＶＰ６０??▲?▲?▲?▲?▲?▲??ＶＰ１０??（ｖＰｇＶ，?１￣Ｌ（Ａ）ｎ??＾?ＶＰ６０??Ｓｕｂｇｅｎｏｍｉｃ?ＲＮＡ??图１－２?ＲＨＤＶ的基因组结构｜８］??Ｆｉｇ．?１－２?Ｇｅｎｏｍｉｃ?ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＲＨＤＶ??通过对相似病毒家族成员的研宄认知，阐明了该病毒基因组部分非结构蛋白的生??物学功能ＷＡＷ。其中，ＲｄＲｐ不仅参与ＲＨＤ病毒的基因组复制见３（），３１１，还能催化??ＶＰｇ尿苷化［２５，３２］，在ＶＰｇ转录中起作用［３３］。而ＲＨＤＶ非结构蛋白ｐｌ６、ｐ２３和ｐ２９??的结构和功能有还不清楚。ＲＨＤＶ含有一个主要结构蛋白ＶＰ６０和一个次要结构蛋白??ＶＰ１０。通过反向遗传学，ＶＰ１０的功能研宄取得了一些进展，其是由基因组３’端和亚?

图１－３?ＶＰ６０的结构［１８］??－

【参考文献】：
期刊论文
[1]兔出血症病毒衣壳蛋白VP60的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 张大鹏,吕宁,符容婕,郭蔼光.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2012(03)
[2]兔出血症病毒衣壳蛋白重组腺病毒的构建、表达及其免疫原性[J]. 胡波,王芳,秦爱建,范志宇,徐为中,张则斌,薛家宾,何孔旺.  江苏农业学报. 2009(06)
[3]兔出血症病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及对家兔的免疫保护效果[J]. 王芳,胡波,任雪枫,范志宇,杨龙圣,徐为中,张则斌,何孔旺.  畜牧兽医学报. 2008(10)
[4]兔出血症病毒NJ85株衣壳蛋白基因在原核系统中的高效表达[J]. 王永山,陆承平,周宗安.  农业生物技术学报. 2004(04)
[5]一种新病毒——兔出血症病毒的鉴定初报[J]. 杜念兴,徐为燕,刘胜江.  病毒学报. 1986(02)



本文编号：3444692